Ingeniaritza genetikoaren intsulina ekoizpena

Intsulina - erregulatzen duen pankreako hormona | karbohidratoen metabolismoa eta cazd maila normala mantenduzpaodolean. Hormona horren gabeziak gorputzean eragiten du.) Gaixotasun larrienetako batera - diabetesa, hau da, heriotzaren kausa, gaixotasun kardiobaskularrak eta minbiziaren ondoren hirugarren postuan dago. Intsulina globulu txikia da | 51 aminoazido hondakin dituen proteina eta bi polipeptido katez osatutako bi zubi disulfuroz osatuta dago. Kate kate bakarreko aitzindaria, preproinsulina duena, sintetizatuta dago koi, seinale zentral peptido bat (23 aminoazido hondakin) eta 35 lotura peptido lotzen dituen (C-peptido). Seinalea peptidoa kentzen denean, 86 aminoazidoren hondakinen proinsulina sortzen da zelulan, A eta B intsulina kateak lotzen baitira.C-neitweed bat, disulfuro bonuan $ 3-rako beharrezko orientazioa ematen diona. C peptidoaren bereizketa proteolitikoa ondoren, intsulina sortzen da.

Diabetesaren hainbat forma ezagutzen dira. Formarik larriena, gaixoak intsulina behar duen tratamendurako (gaixotasuna duen intsulina da), hormona hau sintetizatzen duten zelulen heriotza selektiboa da (pankreasan Langerhans uhartearen zelulak). Diabetes mellitus bat, intsulina tratatzeko beharrezkoa ez den kasuetan, ohikoagoa da, dieta egokien laguntzarekin eta re:> ma. Normalean, behien eta behien pankrea ez da haragi eta kontserba industrian erabiltzen eta hormona erauzketa egiten duten farmazia konpainientzako hozkailu bagoietan jartzen da. 100 g krisi lortzeko! Intsulina tallak 800-1000 kg pentsu behar ditu

Bi kateen sintesia eta haien disudfid lotura intsulina lortzeko lotura 1963an eta 1965ean egin ziren. hiru ikerketa talde AEBetan, Txinan eta Alemanian. 1980an, Novo Industri konpainia daniarrak txerri intsulina gizakiaren intsulina bihurtzeko metodoa garatu zuen, B katean alaninaren 30. hondakina treonina hondar batekin ordezkatuz. Bi intsulina ez ziren jardueraren eta iraupenen arteko desberdintasunak.

Intsulinaren ingeniaritza genetikorako lanak duela 20 urte inguru hasi ziren. 1978an, arratoi proinsulina (AEB) ekoizten duen Escherichia coli-ren arrain baten ekoizpenari buruzko mezu bat agertu zen. Urte berean, gizakiaren intsulina-kateak zeluletan beren gene sintetikoak adieraziz sintetizatu ziren.E.coli(5.11 irudia). Lortutako gene sintetiko bakoitza entzima genearen 3'-muturrera (3-galactosidasa lotu zen) eta plasmido bektorialean sartu zen(PBR322).zelulaE.coli,Horrelako plasmido errekonbinatzaileekin eraldatuta, proteina hibridoak (kimerikoak) sortzen dira p-galactosidasa zati batek eta A edo B intsulina peptido batek erantsitako metionina hondar baten bidez osatuta. Proteina kimerikoa zianogene bromidoarekin prozesatzean, peptidoa askatzen da. Hala ere, eratutako intsulina-kateen artean disulfuro-zubiak ixtea zaila izan zen.

1981ean, intsulina analogikoa, mini-C-pro-insulina, sintetizatu zen, 35 unitateko C-peptidoa sei aminoazidoen segmentu batez ordezkatu zen: arg-arg-gly-ser-lys-arg eta bere adierazpena agertzen da.E.coli.

1980an, W. Gilbert-ek eta bere lankideek intsulina mRNA isolatu zuten arratoizko P-zelula tumorearen tumore batetik eta haren ADNk lortu zuten alderantzizko transkripasa erabiliz. Emaitzen den cDNA plasmidoan sartu zenpBR322E.coli,penizilinasa genearen erdialdean. Plasmido errekonbinanteak proinsulinaren egiturari buruzko informazioa zuen.MRNAren itzulpenaren ondorioz, proteina hibridoa sintetizatu zen penizilinasa eta proinsulinen sekuentziak zituzten zeluletan, halako proteina batetik trypsinarekin digeritu ziren.

1978an, Acad-en zuzendaritzapean Kimika Bioorganikoko Institutuko langileak. Yu. A. Ovchinnikov, neuropeptidoen sintesia kodetzen duten bi gene egituratu sintetizatu ziren:leuzina- enkephalina eta bradikinina.Sintetizatutako leucine enkephalin geneak bi mutur itsatsi zituen:

Eratorritako gene sintetikoa E. coli P-galactosidase genearen sustatzailea eta hurrena den DNA zati natural batekin txertatu da.E.coli,plasmidera

Intsulina lortzea, ingeniaritza genetikoa egiteko metodoak, Bioteknologia - Ikastaroak

1. Intsulinaren 5. egitura eta funtzioak

1.1. Intsulina molekularen 5. egitura

1.2. Intsulinaren garrantzia biologikoa 7

1.3. Intsulina Biosintesia 8

2. Ingeniaritza genetikoaren intsulinaren sintesia 10

2.1. Drogak sintetizatzeko ingeniaritza genetikoko metodoak erabiltzea 10

2.2. Ingeniaritza Genetikoko Metodoak 11

2.3. Ingeniaritza genetikoaren intsulina ekoizpena 14

Testutik ateratzea

Gainera, osagai horiek aldi berean egon daitezke proteina hibridoaren konposizioan. Gainera, proteina hibridoak sortzerakoan, dimentsio aniztasunaren printzipioa erabil daiteke - proteina hibridoan xede polipeptidoaren hainbat kopia egotea, eta horrek produktuaren jomuga nabarmen handitu dezake.

Erresuma Batuan, gizakiaren intsulinaren bi kateak E. coli erabiliz sintetizatu ziren, hormona biologikoki aktiboaren molekula bati lotuta. Organismo bakarreko zelulek intsulina molekulak bere erribosometan sintetizatu ahal izateko, beharrezkoa den programarekin hornitzea beharrezkoa da, hau da, hormona geneari aurkeztea.

Intsulina birkonbinatzailea Errusiako Zientzien Akademiako Institutuan lortu zen genetikoki ingeniaritzako E. coli tentsioak erabiliz. Proteina aitzindari hibridoa hazitako biomasatik adierazten da, kantitateetan adierazitakoa

Preproinsulina duten proteina zelular osoaren 40%.

Intsulina in vitro bihurtzea in vivo sekuentzia berdinean egiten da - polipeptido nagusia hautsi egiten da, preproinsulina intsulina bihurtzen da sulfitolisi oxidatzailearen faseetan, eta ondoren hiru disulfuro loturaren itxiera erreduzitzailea eta C-peptido lotzailearen isolamendu enzimatikoa dira. Ioi-trukaketa, gel eta HPLC purifikazio kromatografikoen ondoren, purutasun handiko eta jarduera naturaleko gizakiaren intsulina lortzen da.

Intsulina lortzeko, tentsio bat erabiltzen da plasmidoan sartutako nukleotidoen sekuentzia batekin, proinsulina lineal batez osatua eta Staphylococcus aureus proteinaren A zati bat bere N-terminalari atxikitako 8, 9, 10 hondakin baten bidez.

Zurtoin birrombinatuaren zelulen biomasa saturatuak lantzeak proteina hibridoa sortzen hasten da, hodian isolamendua eta eraldaketa sekuentziala intsulina lortzeko.

Beste bide bat ere posible da: gizakiaren proinsulina eta polistididina buztana erantsita proteina birkonbinatzaile baten adierazpen-sisteman lortzea metionina hondarraren bidez. Ni-agarosa eta bromaren zatitzailea duten zutabeetan chelatoen kromatografia erabiliz isolatzen da.

Proteina isolatua S-sulfonatoa da. Mapak eta masa analisi espektrometrikoa lortutako proinsulina lortzen den ioi trukearen kromatografiaren bidez anio trukatzeko erretxinaren gainean eta RP (alderantzizko fasea) errendimendu altuko likido kromatografiak erakusten dute disulfuro zubien presentzia gizakiaren proinsulina zubiei dagozkien.

Berriki, ingeniaritza genetikoaren bidez intsulina birkonbinagarria ekoizteko prozedura sinplifikatzeko arreta handia izan da.Adibidez, interleukina liderra peptidoaren lisina hondar bidez N-terminoari atxikitako proinsulina osatzen duten proteina lor dezakezu.

2. Proteina modu eraginkorrean adierazi eta lokalizatzen da inklusio-organoetan. Isolatu ondoren, intsulina eta C-peptidoa sortzeko proteina 5 eta 8, 10 trypsinarekin garbitzen da.

Sortzen den intsulina eta C-peptidoa RP-HPLC bidez arazten dira. Oso esanguratsua da fusio egiturak sortzerakoan eramaile proteinaren eta xede polipeptidoaren masen erlazioa.

C-peptidoak Sfi I murriztapen gunea daramaten aminoazidoen espazioen laguntzarekin eta hasieran eta amaieran bi proteina tarteko saiakuntzetarako distantziaren amaieran erlazionatuta daude buru-buztanaren printzipioaren arabera.

Zatiketa produktuen HPLC-ek erakusten du C-peptidoaren zatiketa modu kuantitatiboan aurrera egiten dela eta, horri esker, gene sintetiko multimerikoak erabiltzea helburu polipeptidoak eskala industrialean ekoizteko.

Ondorio

Erradikal, eta kasu gehienetan, diabetesa mellitus duten gaixoen bizitza eta lan ahalmena mantentzeko modu bakarra intsulina da.

Intsulina praktika klinikoan jaso eta sartu aurretik, ondorio latz bat espero zen urtebete edo bi urtez, I motako diabetesa duten gaixoen sorreratik, dieta ahulenak erabili arren.

I motako diabetesa duten gaixoek intsulina prestaketekin bizitza osorako ordezkatzeko terapia behar dute. Arrazoi batengatik edo besteak beste, intsulina modu erregularrean uzteak konplikazioak azkar garatzea eta gaixoaren heriotza azkarra dakar.

Gaur egun, diabetesaren prebalentzia hirugarren postuan dago sistema kardiobaskularreko gaixotasunak eta tumore gaiztoak ondoren. Helduen artean diabetesaren prebalentzia, Osasunaren Mundu Erakundearen arabera, munduko eskualde gehienetan% 2-5 da eta guztietan handitzen da

1. gaixoen kopurua ia bikoiztu egin zen. Intsulinarekiko menpe dauden gaixoen kopurua, osasun arloan aurrerapen nabaria izan arren, urtero handitzen ari da, eta gaur egun Errusian 2 milioi pertsona inguru daude.

Intsulina ekoizteko metodo itxaropentsuenak ingeniaritza genetikoko metodoak dira. Genetikoki diseinatutako intsulina A eta B kateak bereizten dira ekoizle-tentsio desberdinak erabiliz eta ondoren molekula tolestuz, ondoren isoformak bereiziz eta E. Coli zeluletako proinsulina sintesizatuz.

Genetikako gizakien intsulina prestakinak garatzeko gaitasunak Errusiako diabetologiaren arazo ugari konpontzeko aukera berriak irekitzen ditu diabetesa duten milioika pertsonen bizitza salbatzeko.

Literatura

Balabolkin M.I., Klebanova E.M., Kreminskaya V.M. Diabetes mellitus: diagnostiko eta tratamenduaren alderdi modernoak / Doctor, ed. G. L. Vyshkovsky.-2005.- M .: RLS-2005, 2004.- 960 or.

Gavrikov, A.V. Giza interferentzi birkonbinatzaileen substantzien ekoizpen bioteknologikoaren optimizazioa: dis. ... cand. Biol. Zientziak - M, 2003

Genetikoki diseinatutako giza intsulina. Bereizketa kromatografikoaren eraginkortasuna handitzea bifunzionaltasun printzipioa erabilita. / Romanchikov A.B., Yakimov S.A., Klyushnichenko V.E., Arutunyan A.M., Wulfson A.N. // Kimika Bioorganikoa, 1997 - 23, 2. zk

Glick B., Pasternak J. Metodo bioteknologikoen erabileraren kontrola // B. Glick, J. Parsnip / Molecular Biotechnology = Biotecnologia molekularra. - M.: Mir, 2002 .-- S. 517-532. - 589 or.

Glick B., Pasternak J. Biotecnologia Molekularra. Printzipioak eta aplikazioa. M .: Mir, 2002.

Davis R., Botstein D, Roth J. Ingeniaritza genetikorako metodoak. Bakterioen genetika // R. Davis, D. Botstein, J. Roth / Per. ingelesez.-M.: Mir. - 1984.- 176 or.

Ermishin A.P.Genetikoki Aldatutako Organismoak: Mitoak eta Errealitatea / A. P. Ermishin // Mn .: Tekhnalogaliya.- 2004. - 118 or.

Bioteknologia Farmazeutikoaren oinarriak: Testuliburua / TP Prischep, V.S. Chuchalin, K.L. Zaykov, L.K. Mikhalev. - Rostov-on-Don .: Phoenix, Tomsk: NTL argitaletxea, 2006.

Patrushev L.I. Sistema genetiko artifizialak. // L. I. Patrushev / M .: Nauka.- 2004.

Romanchikov, A.B. Genetikoki diseinatutako giza intsulina. Bereizketa kromatografikoaren eraginkortasuna handitzea bifunzionaltasun printzipioa erabilita. / A.B. Romanchikov eta beste.

// Kimika Bioorganikoa. 1997. 2. zk. 23

Rybchin V.N. Ingeniaritza Genetikoaren Oinarriak // V.N. Rybchin / 2ª ed., Berrikustua. eta gehitu .: Unibertsitateentzako testu liburua. SPb .: SPbSTU argitaletxea. - 2002 .-- 522 s.

Schelkunov S. N. Ingeniaritza genetikoa // Schelkunov S. N. / Novosibirsk: Sib. univ. Argitaletxea. 2008.

Schelkunov, S.N. Ingeniaritza genetikoa: testu liburua. zuzkidura. - 2., ed., Rev. eta gehitu. - Novosibirsk: Sib. univ. Argitaletxea, 2004 .-- 496 or.

1. Intsulina molekulan disulfuro-loturaren kokapena.

2. Intsulina molekulan aminoazidoen hondakinen antolamendua

Intsulinak eragina entzima metaboliko garrantzitsuenetan

Gibeleko muskulua Ehun adiposa Aktibazioa 1. Fosfodiesterasa 1. Fosfodiesterasa 1. LP-lipasa

4. Piruvato deshidrogenasa konplexua

4. Piruvato deshidrogenasa konplexua

5. Fosfatasa glukogen sintasa eta glukogeno fosforilasa

5. Glycogen synthase fosfatasa b. Acetyl-CoA-carboxylase Induction 1. Glucokinase 1. Glyceraldehyde phosphate dehydrogenase

6. Glukosa-6-fosfat deshidrogenasa Errepresioa Fosfenolpiruvato karboxinasa

Fig. 3 Intsulinaren biosintesi eskema Langerhans uhartetiko zeluletan. ER - erretikulu endoplasmikoa. 1 - peptido seinal baten eraketa, 2 - preproinsulinaren sintesia, 3 - peptido seinalearen zatiketa, 4 - proinsulina Golgi aparatura garraiatzea, 5 - proinsulina intsulina eta C-peptido bihurtzea eta intsulina eta C-peptidoa granulatu sekretuetan sartzea, 6 - intsulina jariatzea. eta C peptidoa.

4. Bere aurrekoetatik intsulina sintetizatzeko eskema orokorra

Fig. 5 Intsulinaren sintesia bi kate bereizi eratuz

Gizakiaren intsulina genetikoki lortzeko metodoa

Asmakiak bioteknologiaren arloarekin du zerikusia, eta bereziki, diabetesa mellitus tratatzeko erabiltzen diren drogak fabrikatzeko genetikoki diseinatutako giza intsulina ekoiztearekin.

Metodoa gizakiaren proinsulina, Escherichia coli BL21 / pPINS07 (BL07) edo Escherichia coli JM109 / pPINS07 proteina hibrido baten ekoizle-zurtoin bat ekoizten da, zelulak desintegratuz.

Ondoren, inklusio-organoen aurretiazko garbitzea, proteina aldi berean disolbatu eta disulfuro-loturak zaharberritzea 5-10 dMi ditiotreitol eta 1 mM EDTA bufferraren bidez egiten da, berreginatzea eta berrindartzea fusio-proteinaren berrindurazioa ioi-trukaketa kromatografiaren bidez.

Proteina hibridoaren banaketa trypsinaren eta karboxipeptidasaren B hidrolisiaren bidez egiten da proteina hibridoaren, trypsinaren eta karboxipeptidasaren B 4000: 0,6: 0,9.

Intsulinaren arazketa kromatografia hidrofoboaren edo alderantzizko errendimendu handiko kromatografia likidoaren bidez egiten da gel filtrazioarekin eta intsulina isolatzea zinka gatzen aurrean kristalizatuz. Asmakiak gizakiaren intsulina genetikoa lortzeko prozesua murrizteko eta haren irteera handitzeko aukera ematen du.

Asmakiak bioteknologiaren arloarekin du zerikusia, eta bereziki, diabetesa mellitus tratatzeko erabiltzen diren drogak fabrikatzeko genetikoki diseinatutako giza intsulina ekoiztearekin.

Diabetologia modernoaren lorpen nagusiak eta Osasunaren Mundu Erakundearen gomendioak kontuan hartuta, 2001. urterako Europako herrialdeek giza intsulinaren erabilerarako trantsizioa burutu zuten. Ildo horretan, ADN birkonbinatzaileen teknologiaren metodoak erabiliz intsulina ekoizteko metodoak garatzea premiazkoa da.

Genetikako gizakiaren intsulina ekoizteko metodo ezaguna. E. Coli proinsulina ekoizten duen produkzio-tentsorea lantzean datza. A proteina stafilocockikoaren A. IgG loturazko bi domeinu sintetikoen sekuentzia dauka.

Metodoa bakterioen zelulak suntsitzea, proinsulina duten Taurus inklusioa lortzea, inklusioa desegitea Taurus, proinsulinaren sulfitolisi oxidatzailea, haren berriztapena, proteina berrindunaren arazketa afinitatearen kromatografiaren bidez, Proinsulin entzima proteolitikoekin zatitzea (trypsina eta karboxipeptidasa B) eta azken intsulina araztea eraginkorragoa da. kromatografia (Nilson J., Jonasson P., Samuelsson E., Stahl S., Uhlen M. "Giza intsulinaren ekoizpen integratua eta haren peptido C", Journal of biotechnology, 1996, 48. or., 241-250. or.) .

Metodo honen desabantailak produktuaren kostu handia eta erabilitako intsulina detergenteen produkzioan erabiltzea dira, xede produktuan egon daitezkeenak.

Genetikoki diseinatutako giza intsulina ekoizteko metodo ezaguna, E ekoizle zelulen zelulak lantzean datza.

Coli DN5 a / pVK100, bakterioen zelulak suntsitu ultrasoinuen bidez, bereizteko uretan disolbagarriak diren ureztagarriak diren zentrifugoak dituzten proteina hibridoa zentrifugazio bidez bereiztea, inklusio-organoak 8 M urea, 1 mM dithiotreitol, 0,1 M Tris-HCl; pH 8,0, 12-16 orduz.

Ezpurutasun disolbagarriak zentrifugazio bidez kentzen dira. Horren ondoren, ditiotreitolaren kontzentrazioa 10 mM-ra handitzen da eta disulfuro-loturak 37ºC-tan berreskuratzen dira 1 orduz. Soluzioa 5 aldiz diluitu zen ur hotzarekin, pH 4,5-era egokitu eta 2 orduz inkubatu 4 ºC-tan, prezipitatu bat osatzeko.

Proteina hibridoa zuen prezipitatua zentrifugazioaz bereiztu eta berrizatu zen, ur hotzean disolbatu azkar 10-12 pH-tan. Ondoren, 10 mM glicinaren bufferrarekin, 10,8 pH-rekin diluitu zen eta gauero 4 ºC-tan mantendu zen. Ultrafiltrazioaren ondoren, disoluzioa Sephadex G-50 zutabean gel-iragazketa egin zen eta 10 mM glicina-bufferrarekin eluitu zen.

Fusio proteina duten zatikiak biltzen dira, ultrafiltratuak eta izozteak lehortzen dira. Sortzen den proteina Tris-HCl 0,08 M-ko bufferrean, 7,5 pH-tan disolbatzen da, 10 mg / ml-ko kontzentrazioraino, eta aldi berean clepsin eta carboxypeptidase B (karboxipeptidasa B-ren erlazioa: trypsina: fusio-proteina 0,3: 1: 10) 37-tan. ° C 30 minutuz.

Ondoren, gehitu isopropanola% 40ra. Nahastea DEAE-Sephadex A-25 zutabean kromatografatzen da eta 0,05 M Tris-HCl bufferraren bidez elhuitatzen da, pH 7,5 isopropanol% 40rekin sodio kloruroaren gradiente lineal batekin 0 eta 0,1 m. Isopropanola kendu ondoren, sodio kloruroaren kontzentrazioa egin da. % 25era igo, pH-a 2,0-ra igo eta intsulina-prezipitazioak bildu.

(Chen J.-Q., Zhang H.-T., Hu M.-N., Tang J.-G., "Giza intsulina E. Coli sisteman produkzio met-gizatiarra duen proinsulina adierazita bezala" aitzindaria "Biokimika Aplikatua eta Bioteknologia, 1995, 55. or., 5-15. or.).

Metodo honen desabantailak, besteak beste, gel filtrazioa hasierako faseetan erabiltzea da, eta horrek sorbent kopuru garrantzitsuak eta proteina hibridoaren banaketan erabiltzen diren entzima ugari eskatzen ditu.

Genetikako gizakiaren intsulina ekoizteko metodo ezaguna. Escherichia coli JM109 / pPINS07 produkzio-tentsorea lantzea da. Bakterioen zelulak suntsitu, desintegrazioaren bidez bereizten dira. Proteina hibridoa duten inklusio-organoak bereiztu, urea eta ditiotreitol berreginatu eta araztu egin dira. % 40 isopropanoletan ezpurutasun konposatuen prezipitazioa KM-sefaroan kromatografiaren ondoren, bere sekuentzia sekuentzionala tripsinarekin eta karboxipeptidasarekin B, berriz, produktuak trypsinolisia SP-Sepharose-n kromatografiatu da, 0,03-0,1 M-ko amonato azetato-bufferrarekin 5,0-6,0 pH-rekin 6 M urea edukitzen duena, proteina elurtuz 0 eta 0,5 M-ko sodio kloruroaren gradiente lineala duena. bufferra eta B-kotoxipeptidasa B-rekin zatitu ondoren lortutako intsulina frakzioa errendimendu handiko kromatografia likidoaren alderantzizko fasearen bidez garbitu zen (RP HPLC) eta, ondoren, gel filtrazioarekin egin zen (Pat. RF. 2141531, MKI C12P 21/02, argita.). 1999)

Metodoaren eragozpenen artean proteina hibridoaren arazketaren fasean urea eta disolbatzaile organiko garrantzitsuak erabiltzea dira.

Diabeten aditua

Intsulina erabili aurretik, diabetes mellitus gaixo baten bizi-itxaropena ez zen 10 urte baino gehiagokoa izan. Droga hau asmatzeak milioika paziente salbatu ditu. Giza ingeniaritza genetikoko intsulina da zientziaren aurrerapena.

Urte askoko lan gogorraren emaitza

Ingeniaritza genetikoa (errekonbinantea) prestatu aurretik asmakizuna, intsulina behien eta txerrien pankreatik isolatu zen.

Intsulina txerriaren eta gizakiaren arteko aldea aminoazido bakarra da

Droga lortzeko metodo honen desabantailak:

• lehengai biologikoak biltegiratzeko eta garraiatzeko konplexutasuna,
• abeltzaintza falta
• pankreako hormona esleitzeko eta arazteko lotutako zailtasunak,
• Erreakzio alergikoak izateko arrisku handia.

1982an gizakiaren intsulina naturalaren bioreaktorearen sintesiarekin, aro bioteknologiko berria hasi zen. Intsulinoterapiaren egunsentian zientzialarien helburua gaixoaren biziraupena baino ez bada, gure garaian droga berriak garatzea gaixotasunaren kalte-ordaina jasangarria lortzea da. Ikerketa zientifikoen helburu nagusia da diabetesa duen gaixo baten bizi kalitatea hobetzea.

Teknologia modernoa

Droga motak, prestatzeko metodoaren arabera:

Zer gertatzen da gorputzean drogaren ondoren?

Zelula mintzaren hartzailearekin konektatuz, intsulinak honako prozesu hauek ezartzen dituen konplexua osatzen du:

1. Glukosa zelulen garraioa hobetzen du eta bere xurgapena errazten du.
2. Glukosaren prozesuan parte hartzen duten entzimak askatzea sustatzen du.
3. Gibelean glukogenoaren eraketa tasa murrizten du.
4. Gantz eta proteinen metabolismoa estimulatzen du.

Larruazalpeko administrazioaren kasuan, intsulina 20-25 minututan hasten da jokatzen. Sendagaiaren iraupena 5 eta 8 ordu bitartean. Intsulinazina entzimak kentzen du eta gernuan kanporatzen da. Droga ez da plazenta zeharkatzen eta ez da bularreko esnetara pasatzen.

Noiz eskatzen da genetikoki diseinatutako intsulina?

Premiazko laguntza behar izanez gero

Genetikoki diseinatutako giza intsulina kasu hauetan erabiltzen da:

1. 1 motakoa edo 2 motako diabetesa. Tratamendu independente gisa edo beste sendagaiekin batera erabiltzen da.
2. Ahozko agente hipogluzemikoekiko erresistentziarekin.
3. Haurdun dauden emakumeekin diabetesa.
4. Giltzurrunak eta gibelak eragindako konplikazioen kasuan.
5. Intentsitate handiko intsulina aldatzerakoan.
6. Preoperatorioan.
7. Bizitza arriskuan jartzeko baldintzen kasuan (coma hiperosmolarra edo ketoakidotikoa).
8. Larrialdi egoeretan (erditzea baino lehen, lesioekin).
9. Larruazaleko lesio distrofikoak badaude (ultzerak, furunkulosi).
10. Diabetesa tratatzeko infekzioaren aurrekariak.

Giza ingeniaritza genetikoko intsulina oso ondo jasaten da eta ez du erreakzio alergiorik sortzen, hormona naturalaren guztiz berdina baita.

Etengabeko jarraipena garrantzitsua da!

Debekatuta dago botikak errezetatzea:

• odol azukrea jaistea
• drogaren hipersentsibilitatea.

Botika izendatu ondorengo lehen egunetan, pazientearen jarraipen zehatza egin behar da.

Bigarren mailako efektuak

Urtikaria arriskua! Quincke-ren edema!

Gutxitan gertatzen denean, intsulina erabiltzen denean, honako konplikazio hauek izan daitezke:

• erreakzio alergikoak (urtikaria, Quincke-ren edema, azalaren azkura),
• odol azukrearen beherakada nabarmena (gorputza drogak errefusatzeagatik edo immunologia gatazkaren baten ondorioz garatzen da),
• kontzientzia narriatua
• kasu larrietan, koma hipogluzemikoaren garapena posible da,
• egarria, aho lehorra, letargia, jateko gogoa galtzea,
• hipergluzemia (infekzioa edo sukarra hondoan botika erabiltzen denean),
• aurpegiko gorritasuna
• tokiko erreakzioak administrazioaren eremuan (erretzea, azkura, atrofia edo larruazalpeko gantza ugaltzea).

Batzuetan, drogaren egokitzapena hantura eta ikusmen urritasuna bezalako nahasteak izaten dira. Manifestazio horiek normalean aste batzuen buruan desagertzen dira.

Nola aurkitu genetikoki diseinatutako intsulina farmazia batean?

Medikuntza gurasoen administraziorako irtenbide moduan dago eskuragarri:

Ez da zaila gaixoaren banakako ezaugarriak kontuan hartuta intsulina prestaketa bat aukeratzea.

Erabilpen baldintzak

Gehienetan intsulina larruazalpeko administrazioa erabiltzen da.

Premiazko kasuetan, drogak barnean ematen dira.

Gaixoaren egoera larrian

Esperientzia duen diabetiko batek ere drogak erabiltzerakoan akatsak egin ditzake.

Konplikazioak ekiditeko beharrezkoa da:

1. Erabili aurretik, egiaztatu sendagaiaren iraungitze data.
2. Jarraitu biltegiratzeko gomendioak: ordezko ontziak hozkailuan gorde behar dira. Garatutako botella giro tenperaturan gorde daiteke leku ilun batean.
3. Ziurtatu dosi egokia gogoratzen duzula: irakurri berriro medikuaren errezeta.
4. Injekzioaren aurretik ezinbestekoa da xiringatik airea askatzea.
5. Larruazala garbia izan beharko litzateke, baina nahitaezkoa da alkohola erabiltzea prozesatzeko, sendagaiaren eraginkortasuna murrizten baitu.
6. Aukeratu injekziorako tokirik onena. Sabelaren azalaren azpian sartzen denean, drogak azkarrago jokatuko du. Intsulinaren xurgapen motelagoa gluteal tolestura edo sorbaldan sartzen denean.
7. Erabili azalera osoa (tokiko konplikazioen prebentzioa). Injekzioen arteko distantzia 2 cm-koa izan behar da gutxienez.
8. Hartu larruazala krisian, giharrean sartzeko arriskua murrizteko.
9. Injektu xiringa larruazalaren azpian angeluarekin, sendagaiak ez gerta ez dadin.
10. Urdailean injektatzen denean, ekintza laburra intsulina ematen zaio otordu bat baino 20 minutu lehenago. Sorbalda edo ipurmasailak aukeratzeko kasuan - bazkaria baino hogeita hamar minutu lehenago.

Beste droga batzuekin konbinatzea

Diabetearekin askotan, gaixoak hainbat botika hartzen ditu. Beste droga batzuekin konbinatzeak genetikoki diseinatutako intsulinaren eragin terapeutikoa eragin dezake.

Konplikazioak saihesteko, jakin behar duzu:

Gaindosi

Zenbait kasutan, intsulina administrazioak odol azukrearen bat-bateko beherakada dakar. Dosia hautaketa okerra dela eta sortzen da maiz arazoa.

Hipogluzemiaren hasierako sintomak:

• ahultasuna
• azalaren zurbila
• antsietate egoera
• zorabioak,
• desorientazioa,
• beso, hankak, mihia eta ezpainak,
• gorputz dardarak
• izerdi hotza
• gose sentimendu sendoa
• buruko minak.

Dardara; ongizatearen bat-bateko hondatzea

Horrelako sintomak zure baitan antzematen badituzu, erraz digeritu behar dituzun karbohidratoak dituen zerbait jan behar duzu. Cookieak, gozokiak, azukre zati bat edo ogi zuria izan daitezke. Te gozoak horrelako egoeretan laguntzen du.

Egoera okertzen bada, anbulantzia batera deitu behar duzu. Hipogluzemiak gaixoaren koma edo heriotza eragin dezake.

Intsulina birkonbinagarria arriskutsua al da?

Ongi! Intsulina birkonbinatzailea ez da naturala. Hori lortzeko, genetikoki eraldatutako bakterioak erabiltzen dira.

Ingeniaritza genetikoko teknologiak erabiliz, intsulina genea duen DNA errekonbinante bat E. coli zelulan inplantatu da. Genetikoki eraldatutako organismoek hormona biderkatu eta sortzen dute. Droga oso eraginkorra da eta arazketa maila handia du.

Intsulina. II zatia. Intsulina mikrobiologikoa ekoiztea

afinitate osagaia - proteina hibridoaren isolamendua nabarmenki erraztuz.

Kasu honetan, bi osagai hauek aldi berean egon daitezke proteina hibridoaren konposizioan.

Horrez gain, proteina hibridoak sortzerakoan, dimentsio anitzeko printzipioa erabil daiteke (hau da, proteina hibridoan xede polipeptidoaren hainbat kopia daude), eta horrek nabarmen handitu dezake produktuaren errendimendua.

2 Proinsulinaren adierazpena E. coli zeluletan.

Lanean, egileek JM 109 N1864 tentsioa erabili zuten plasmidoan proteina hibridoa adierazten duen sekuentzia nukleotido batekin, proinsulina lineala eta Staphylococcus aureus proteinaren A zati bat bere N-terminalari itsatsita metionina hondarraren bidez.

Zurtoin birrombinatuaren zelulen biomasa saturatuak lantzeak proteina hibridoa sortzen hasten da, hodian isolamendua eta eraldaketa sekuentziala intsulina lortzeko.

Beste ikertzaile talde batek proteina birkonbinantea jaso zuen bakterioen adierazpen sisteman, gizakiaren proinsulinez osatutako fusio baten eta horri itsatsitako polistididinaren buztana metionina hondar baten bidez. Inklusio-gorputzetako Ni-agarose zutabeetan chelatoen kromatografia erabiliz isolatu zen eta cyanogen bromide-rekin digeritu zen.

Hartutako proinsulinaren mapeketa eta masa analisi espektrometrikoak, ioi-trukaketaren kromatografiaren bidez anioien erretxinaren trukean eta RP (alderantzizko fasea) HPLC (errendimendu handiko likido kromatografiak) erakutsi zuten disulfuro zubien presentzia gizakiaren proinsulina zubiei dagozkien zubien presentzia. Idazlanean, zelula prokariotoetan giza intsulina ekoizteko metodo berria eta hobe baten garapenaren berri ematen da. Egileek aurkitu zuten egituran eta jarduera biologikoan sortzen den intsulina pankreasetik isolatutako hormonaren berdina dela.

Berriki, ingeniaritza genetikoaren bidez intsulina birkonbinagarria ekoizteko prozedura sinplifikatzeko arreta handia izan da. Beraz, egileek lisina hondarraren bidez proinsulinaren N-muturrera atxikitako interleukina 2 peptidoaren liderra osatutako fusio proteina lortu zuten.

Proteina modu eraginkorrean adierazi eta lokalizatu zen inklusio-organoetan. Isolatu ondoren, proteina tripsinarekin digeritu zen intsulina eta C-peptidoa sortzeko. Beste ikertzaile talde batek modu berdinean jokatu zuen.

Estafilocokoaren proinsulina eta bi domeinu sintetikoz osatutako fusio-proteina. IgG lotespen proteina inklusio-organoetan lokalizatu zen, baina adierazpen maila handiagoa zuen. Proteina afinitatearen kromatografiaren bidez isolatu zen IgG erabiliz eta trypsinarekin eta carboxipeptidasarekin B prozesatu ziren.

Horren ondorioz intsulina eta C-peptidoa RP HPLC bidez garbitu ziren. Fusitako egiturak sortzerakoan, oso adierazgarria da proteina eramaile eta xede polipeptidoaren masa proportzioa.

Beraz, obrak fusio egituren eraikuntza deskribatzen du, non gizakia albumina serumarekin lotzen zen proteina polipeptido garraiatzaile gisa erabiltzen zen. Hiru, hiru eta zazpi C-peptido atxiki zitzaizkion.

C-peptidoak buru-buztanean lotzen ziren Sfi I murrizketa gunea zuten aminoazidozko zuriuneak erabiliz hasieran eta amaieran bi tartearekin, ondoren, proteina zatitzeko. Zatiketa produktuen HPLC-ek erakutsi zuen C peptidoaren zatiketa kuantitatiboa dela eta, horri esker, gene sintetiko multimerikoak erabiltzea xede polipeptidoak eskala industrialean lortzeko.

Lanak pro32ulina mutantearen prestaketa deskribatzen du, Arg32Tyrren ordezkapena jaso zuena. Proteina hau trypsinarekin eta carboxipeptidasearekin batera estalita zegoenean, intsulina autoktonoa eta tirozinaren hondakina zuen C-peptido bat osatu ziren. Azken hori, 125I etiketatu ondoren, aktiboki erabiltzen da erradioinmunoensaiotan. 3 Intsulinaren arazketa.

Sendagaiak fabrikatzeko pentsatutako intsulinak purutasun handiko arazoak izan behar ditu. Beraz, produkzio-fase bakoitzean lortutako produktuen garbitasunaren kontrol oso eraginkorra beharrezkoa da. Aurretik, RP eta IO (ion trukaketa) HPLC erabiltzen ziren proinsulina-S-sulfonatoa, proinsulina, A eta B indar kateak eta haien S-sulfonatoak karakterizatzeko.

Intsulina fluoreszenteen deribazioari ere arreta berezia ematen zaio. Lanean, egileek metodo kromatografikoen aplikagarritasuna eta informatibitatea ikertu zituzten produktuak gizakien intsulina ekoizteko fase guztietan aztertzeko eta eragiketa kromatografikoen egitaraua osatu zuten, produktuak eraginkortasunez bereizteko eta karakterizatzeko.

Gainera, intsulinaren purutasuna eta kantitatea zehazteko prozesuak automatizatzeko eta azkartzeko planteamenduak garatzen ari dira.

Paperak RP likidoaren kromatografia erabiltzeko aukeraren azterketen berri ematen du intsulina zehazteko elektrokimikarekin, eta Langerhans uhartetik isolatutako intsulina zehazteko metodologia garatu zen espektrometrikoaren detekzioarekin.

Lanean, laser fluoreszentziaren detekzioarekin elektroforesi kapilarra erabiliz intsulina mikrodeterminazio azkarra erabiltzeko aukera ikertu zen. Azterketa fenisisiotiocianatoarekin (FITC) etiketatutako intsulina kantitateari eta intsulina antigorputz monoklonalen Fab zatiari laginari gehituz egin da. Intsulinatuak etiketatu eta erregularki Fab konplexurako lehiatzen dira. FITZ etiketatutako intsulina eta Fab-ekin duen konplexua 30 segundotan bereizten dira.

Berriki, intsulina ekoizteko metodoak hobetzera bideratu dira obra ugari, baita oinarritutako dosi formak sortzera ere.

Adibidez, Estatu Batuetan, intsulina analogiko hepatospecifikoak patentatzen dira, hormona naturalaren egiturak desberdinak baitira aminoazidoaren hondakin desberdinak A katearen 13-15 eta 19. posizioetan eta B katearen 16. posizioan.

Lortutako analogoak diabetesa mellitus tratamenduan kapsulak bereziak direnean, kapsulak bereziak direnean (kapsuladunak, intramuskularrak, larruazalarrak), intranasal dosifikazio formak eta beste batzuk erabiltzen dira. Injekziorik gabe administratutako dosi formak sortzea da garrantzi berezia.

Idazlanak ahozko administraziorako sistema makromolekular bat sortzearen berri ematen du. Intsulina proteina naturalen entzima inhibitzaileekin aldatutako polimero hidrogel baten bolumenean immobilizatuta dago. Horrelako droga baten eraginkortasuna larruazalpean sartutako intsulinaren intsulinaren eraginkortasunaren% 70-80 da.

Beste lan batean, droga bat globulu gorriekin intsulina bakarreko urratsa lortzen da, 1-4: 100 arteko erlazioan hartua, agente lotesle baten aurrean.Egileek 1000 unitate / g-ko jarduera duen sendagaia jaso dutela jakinarazi dute, ahozko administrazioa eta hainbat urtez gordetako jardueraren kontserbazioa forma liofilizatuan.

Intsulinan oinarritutako sendagai eta dosi modu berriak sortzeaz gain, ikuspegi berriak garatzen ari dira diabetearen arazoa konpontzeko.

Horrela, egileek GLUT2 glukosa-garraioaren proteina ADADNa transfectatu zuten, aurretik modu egonkorrean, HEP G2 ins zelulen intsulina cDNA tamaina osoarekin transfectatu zuten.

Lortutako HEP G2 Insgl klonetan, glukosak intsulinaren sekrezio normaletik hurbil estimulatzen du eta sekrezioaren beste estimulatzaileen erantzun sekretua indartzen du.

Mikroskopio immunoelektronikoaren azpian, intsulina duten granulak aurkitu ziren, Langerhans uhartetxoetako b-zeluletan morfologikoki antzekoak diren zeluletan. 1 motako diabetesaren tratamendurako ingeniaritza genetikoak lortutako "zelula b artifizialak" erabiltzeko aukera eztabaida larria da gaur egun.

Arazo praktikoak konpontzearekin batera, intsulinaren ekintza-mekanismoak eta molekulan harreman estrukturalak eta funtzionalak aztertzen dira. Ikerketa-metodoetako bat intsulinaren hainbat deribatu sortzea eta haien propietate fisikokimikoak eta immunologikoak aztertzea da 23, 24.

Arestian esan bezala, intsulina ekoizteko hainbat metodo hormona hau ekoizteko aitzindaria (proinsulina) moduan oinarritzen da, eta ondoren, intsulina eta C-peptidoarekiko zatiketa enzimatikoa da. Gaur egun, jarduera biologikoaren presentzia C-peptidoarentzat frogatu da eta horri esker intsulina-rekin batera helburu terapeutikoetarako erabil daiteke.

Serie honetako artikuluek C peptidoaren propietate fisikokimikoak eta biologikoak aintzat hartuko dituzte, baita hura prestatzeko metodoak ere.

Bioteknologia sendagaien fabrikazioan

Interesgarriak dira STGh-ren 20K bertsioa lortzeko garapenak. Zeregin itxaropentsua da STH mota ezberdinak ez ezik, baita STH immobilizatzea ere, hormonaren ekintza luzea lortzeko. Modu luzearekin STHch immobilizatua lortzeko metodo original bat garatu da.

STHren ekoizpenarekin batera, adenohipofisiaren hormonak ekoizteko teknologia integratu bat sortu zen, espezie espezifiko guztiak barne, eta GSTtik egindako aldaketetako batzuk sortu ziren. Garrantzia handia du ingeniaritza genetikoaren bidez lortutako STH (somatogenoa) sendagai terapeutikoa sortzeko zuzendutako programa ezartzea.

Esperientzia klinikoak frogatu du stunting tratamendua optimizatuz, komeni dela arsenalean hainbat teknologia edo metodo metodoek (MF, Ausomatin, Somatogen) lortutako antzeko prestakuntza farmazeutikoak izatea.

STHh prestaketa batekin epe luzerako tratamenduak (urteetan) gorputzean duen sentsibilitatea gutxitzea eragiten du.

Hein batean, antigorputzak sortzearen emaitza izan daiteke, baina arrazoi nagusia hormonaren hartzaileen mailan eta prozesuan bilatu behar da.

GST-rekin lan egiteak, eta hormon sekretuen azterketa integralak eta haien hainbat forma ahalbidetzen ditu naturak sortutako sistemak aztertzeko eta hobeto ulertzeko. Gorputzean STH mota desberdinak egoteak haien bideragarritasuna eta erabilera posiblea adierazten du, esate baterako, klinika batean.

STHch prestaketa berriak sortzerakoan, beharrezkoa da lehenik eta behin hormonaren jatorrizko forma naturaletara bideratzea eta, hala badagokio, ingeniaritza genetikoaren arabera eskalatzea, STHch monomeroarekin egiten den bezala.

GST-ren STHch prestakinak ekoiztean, adenohipofisiaren beste hormona batzuk (LGH, FSHch, TTGch eta beste batzuk) ekoizteko industria-teknologia integrala ezartzen da. Ekoizpena optimizatu behar da metodo aurreratu berriak sartuz (afinitatearen kromatografia, etab.).

), hormona oso puruak jaso teknologia integratua erabiliz.

Beharrezkoa da diagnostikatzeko eta bioteknologia egiteko adenohipofisiaren hormonen immunomikroanalisi multzoen produkzioa eta erabilera zabaltzea, hainbat eskalako antigorputz normalizatuen ekoizpen arautua egiteko, STHch prestakin berriak sortzeko, immobilizatutakoak barne.

STH proteinen, gantzen eta mineralen metabolismoan eragina izateak, zelularen mailan jokatzen du xede-organorik gabe eta anabolikoa izateak aukera ona ematen du erabiltzeko konponketa prozesuak estimulatzeko eta hainbat gaixotasun tratatzeko. Gai horien azterketa zabalagoa, baita STGch-en aldatutako hainbat forma eta aldaera erabiltzeko aukera ere, premiazkoa eta itxaropentsua da.

Intsulina lortzea bioteknologian

Intsulina, pankreasko Langerhans uhartetxoen hormona peptidikoa da diabetearen tratamendu nagusia. Gaixotasun hau intsulina gabeziak sortzen du eta odol glukosa handitzen dela adierazten da. Duela gutxi arte, zezena eta txerri baten pankreatik intsulina lortzen zen.

Droga gizakiaren intsulinarengandik desberdintzen zen 1-3 aminoazidoren ordez, beraz, erreakzio alergikoen mehatxua zegoen, batez ere haurrengan. Intsulinaren erabilera terapeutiko hedatua kostu handiagatik eta baliabide eskasengatik mugatu zen.

Aldaketa kimikoa zela eta, animalien intsulina gizakiarengandik bereizten zen, baina produktuaren prezioaren igoera gehigarria suposatu zuen.

1982az geroztik, EliLilly genetikoki diseinatutako intsulina ekoizten ari da E. coli A eta B kateen bereizmen sintesian oinarrituta. Produktuaren kostua nabarmen murriztu da; ondorioz, intsulina gizakiaren berdina da. 1980. urtetik, preinsulina genearen klonazioari buruzko txostenak egon dira, proteolisi mugatua duen forma heldua eraldatzen duen hormona-aitzindaria.

Kapsulazio teknologia diabetesa tratatzeko ere aplikatzen da: kapsula bateko pankreako zelulek, gaixoaren gorputzean behin sartuta, intsulina sortzen dute urtean zehar.

Genetika Integratuak hormona follikulatzaile estimulatzaileak eta luteinizatzaileak jarri ditu abian. Peptido hauek bi azpitaldez osatuta daude. Nerbio-sistemako hormona oligopeptidoen sintesi industriala ageri da: enkepalinak, aminoazidoen 5 hondakinetatik sortuak, eta endorfinak, morfinaren analogiak.

Arrazionalki erabiltzen direnean, peptido hauek mina arintzen dute, umore ona sortzen dute, eraginkortasuna areagotzen dute, arreta bideratzen dute, memoria hobetzen dute eta loa eta esnatzea eskatzen dute.

Ingeniaritza genetikoko metodoen aplikazio arrakastatsuaren adibidea da p-endorfinaren sintesia goian deskribatutako proteina hibridoaren teknologia erabiliz, beste peptido hormona bat somatostatina.

Giza intsulina ekoizteko metodoak:

Historikoki, intsulina lortzeko lehen modua hormona honen analogiak iturri naturaletatik (ganaduen eta txerrien pankreasko uhartetxoak) isolatzea da.

Joan den mendeko 20ko hamarkadan aurkitu zen ardi- eta txerri-intsulinek (egituran eta aminoazidoen sekuentzian gertatutako giza intsulinarengandik hurbilenak) giza gorputzean gizakiaren intsulina bezalako jarduera erakusten dutela. Horren ondoren, zezen edo txerri intsulina erabili zen I motako diabetesa duten gaixoen tratamendurako.

Hala ere, denbora gutxiren buruan frogatu zen zenbait kasutan behien eta txerriaren intsulinaren aurkako antigorputzak gizakiaren gorputzean metatzen hasten direla, eta ondorioz, haien eragina ukatzen dute.

Bestalde, intsulina lortzeko metodo honen abantailetako bat lehengaien eskuragarritasuna da (behi eta txerri intsulina kantitate handietan erraz lor daiteke), eta horrek paper erabakigarria izan zuen gizakiaren intsulina ekoizteko lehen metodoaren garapenean.Metodo honi semi-sintetikoa deritzo.

Giza intsulina ekoizteko metodo honetan txerri intsulina erabili zen pentsu gisa. B katearen C-terminal octapeptidoa txerri intsulinaren araztegitik garbitu zen, eta ondoren, gizakiaren intsulinaren C-terminal octapeptidoa sintetizatu zen.

Gero kimikoki atxiki zen, talde babesgarriak kendu eta horren ondorioz intsulina garbitu zen. Intsulina lortzeko metodo hau probatzean, gizakiaren intsulinari lortutako hormonaren identitate osoa erakutsi zen.

Metodo honen desabantaila nagusia sortzen den intsulinaren kostu handia da (orain ere, octapeptidoaren sintesi kimikoa plazer garestia da, batez ere eskala industrialean).

Gaur egun, gizakiaren intsulina batez ere bi eratara lortzen da: txerri intsulina aldatuz, metodo sintetiko-entzimatikoaz eta ingeniaritza genetikoaren metodoaren bidez.

Lehenengo kasuan, metodoa honako hau da: txerri intsulina desberdina dela gizakiaren intsulinarengandik, ordezkapen bakarrean Ala30Thr B katearen C-muturrean.

Alanina treoninaren ordez, alanina disolbatutako entzima-katalizazio bidez egiten da eta horren ordez karboxilo taldea babesten duen treonina hondakina gehitzen da, erreakzioaren nahasketan gehiegizko presentzia dagoena. O-tert-butil talde babesgarria zatitu ondoren, gizakiaren intsulina lortzen da.

Intsulina helburu komertzialetarako lortu den lehenengo proteina izan zen DNA birkonbinanteen teknologia erabiliz. Bi ikuspegi nagusi daude genetikoki diseinatutako giza intsulina ekoizteko.

Lehenengo kasuan, bereizten dira (ekoizle-tentsio desberdinak) bi kateetarako, eta ondoren molekula tolestea (disulfuro-zubiak eratzea) eta isoformak bereiztea lortzen da.

Bigarrenean, prekursorearen (proinsulina) formaren ondoren, tripsina eta karboxipeptidasa B digestio entzimatikoarekin hormonaren forma aktibora.

Gaur egun, hobe da intsulina lortzea aitzindari moduan, disulfuro-zubien itxiera egokia bermatzen duena (kateak bereizirik egonez gero, desnaturalizazio zikloak, isoformak bereiztea eta berregokitzea).

Bi planteamenduekin posible da hasierako osagaiak (A- eta B kateak edo proinsulina) banan-banan lortzea, eta proteina hibridoen zati gisa. A eta B kateak edo proinsulina gain, proteina hibridoak hauek izan ditzakete:

1) garraiatzaile proteina - proteina hibrido baten zelula edo kulturako bitarteko espazio periplasmora garraiatzea;

2) afinitate osagaia - proteina hibridoaren isolamendua nabarmenki errazten du.

Kasu honetan, bi osagai hauek aldi berean egon daitezke proteina hibridoaren konposizioan. Horrez gain, proteina hibridoak sortzerakoan, dimentsio anitzeko printzipioa erabil daiteke (hau da, proteina hibridoan xede polipeptidoaren hainbat kopia daude), eta horrek nabarmen handitu dezake produktuaren errendimendua.

E. coli zeluletan proinsulinaren adierazpena ..

Tentsioa JM 109 N1864 fusio-proteina adierazten duen nukleotidoen sekuentzia batekin. Proinsulina lineal batek eta Staphylococcus aureus proteina batek osatzen dute. Lan horretan, N-terminalari itsatsitako zatia erabili da metionina hondarraren bidez.

Zurtoin birrombinatuaren zelulen biomasa saturatuak lantzeak proteina hibridoa sortzen hasten da, hodian isolamendua eta eraldaketa sekuentziala intsulina lortzeko.

Beste ikertzaile talde batek proteina birkonbinantea jaso zuen bakterioen adierazpen sisteman, gizakiaren proinsulinez osatutako fusio baten eta horri itsatsitako polistididinaren buztana metionina hondar baten bidez. Inklusio-gorputzetako Ni-agarose zutabeetan chelatoen kromatografia erabiliz isolatu zen eta cyanogen bromide-rekin digeritu zen.

Hartutako proinsulinaren mapeketa eta masa analisi espektrometrikoak, ioi-trukaketaren kromatografiaren bidez anioien erretxinaren trukean eta RP (alderantzizko fasea) HPLC (errendimendu handiko likido kromatografiak) erakutsi zuten disulfuro zubien presentzia gizakiaren proinsulina zubiei dagozkien zubien presentzia. Zelula prokariotoetan gizakiaren intsulina ekoizteko metodo berri eta hobe baten garapenaren berri ematen da. Egileek aurkitu zuten egituran eta jarduera biologikoan sortzen den intsulina pankreasetik isolatutako hormonaren berdina dela.

Berriki, ingeniaritza genetikoaren bidez intsulina birkonbinagarria ekoizteko prozedura sinplifikatzeko arreta handia izan da. Horrela, fusio-proteina lortu zen lisina-hondarraren bidez proinsulinaren N-muturrean atxikitako interleukinazko peptido nagusiaz osatuta. Proteina modu eraginkorrean adierazi eta lokalizatu zen inklusio-organoetan.

Isolatu ondoren, proteina tripsinarekin digeritu zen intsulina eta C-peptidoa sortzeko. Beste ikertzaile talde batek modu berdinean jokatu zuen. Estafilocokoaren proinsulina eta bi domeinu sintetikoz osatutako fusio-proteina. IgG lotespen proteina inklusio-organoetan lokalizatu zen, baina adierazpen maila handiagoa zuen.

Proteina IgG afinitatearen kromatografiaren bidez isolatu zen eta trypsinarekin eta carboxipeptidasarekin B. digeritu zen. Intsulina eta C-peptidoa RP HPLC bidez garbitu ziren. Fusitako egiturak sortzerakoan, oso adierazgarria da proteina eramaile eta xede polipeptidoaren masa proportzioa.

Fusioaren eraikuntzak giza serum albumina lotzen duen proteina erabiltzen da garraiatzailea polipeptido gisa. Hiru, hiru eta zazpi C-peptido atxiki zitzaizkion.

C-peptidoak buru-buztanean lotzen ziren Sfi I murrizketa gunea zuten aminoazidozko zuriuneak erabiliz hasieran eta amaieran bi tartearekin, ondoren, proteina zatitzeko. Zatiketa produktuen HPLC-ek erakutsi zuen C peptidoaren zatiketa kuantitatiboa dela eta, horri esker, gene sintetiko multimerikoak erabiltzea xede polipeptidoak eskala industrialean lortzeko.

Pro32ulina mutantea lortzea. Arg32Tyrren ordezkoa zegoen. Proteina hau trypsinarekin eta carboxipeptidasearekin batera estalita zegoenean, intsulina autoktonoa eta tirozinaren hondakina zuen C-peptido bat osatu ziren. Azken hori, 125I etiketatu ondoren, aktiboki erabiltzen da erradioinmunoensaiotan.

Sendagaiak fabrikatzeko pentsatutako intsulinak purutasun handiko arazoak izan behar ditu. Beraz, produkzio-fase bakoitzean lortutako produktuen garbitasunaren kontrol oso eraginkorra beharrezkoa da. Aurretik, RP eta IO (ion trukaketa) HPLC erabiltzen ziren proinsulina-S-sulfonatoa, proinsulina, A eta B indar kateak eta haien S-sulfonatoak karakterizatzeko.

Intsulina fluoreszenteen deribazioari ere arreta berezia ematen zaio. Lanean, egileek metodo kromatografikoen aplikagarritasuna eta informatibitatea ikertu zituzten produktuak gizakien intsulina ekoizteko fase guztietan aztertzeko eta eragiketa kromatografikoen egitaraua osatu zuten, produktuak eraginkortasunez bereizteko eta karakterizatzeko.

Gainera, intsulinaren purutasuna eta kantitatea zehazteko prozesuak automatizatzeko eta azkartzeko planteamenduak garatzen ari dira.

Intsulina zehazteko detektazio elektrokimikoarekin RP likidoen kromatografia erabiltzeko aukerari buruzko ikerketak azaltzen dira, eta detektazio espektrometrikoa duten Langerhans uhartetik isolatuta dagoen intsulina zehazteko metodologia garatu da.

Lanean, laser fluoreszentziaren detekzioarekin elektroforesi kapilarra erabiliz intsulina mikrodeterminazio azkarra erabiltzeko aukera ikertu zen.Azterketa fenisisiotiocianatoarekin (FITC) etiketatutako intsulina kantitateari eta intsulina antigorputz monoklonalen Fab zatiari laginari gehituz egin da. Intsulinatuak etiketatu eta erregularki Fab konplexurako lehiatzen dira. FITZ etiketatutako intsulina eta Fab-ekin duen konplexua 30 segundotan bereizten dira.

Ingeniaritza genetikoaren intsulina

Intsulina zertan datzan galdetzea interesgarria da medikuei eta farmazialariei ez ezik, diabetes mellitus duten pazienteei, baita haien senideei eta lagunei ere.

Gaur egun, gizakiaren osasuna lortzeko hormona berezi eta hain garrantzitsua hainbat lehengaietatik lor daiteke, bereziki garatutako eta arretaz probatutako teknologiak erabiliz. Prestatzeko metodoaren arabera, intsulina mota hauek bereizten dira:

• Txerri edo behia, animalia-produktu ere deitzen zaio
• Txerri biosintetikoa aldatua
• Genetikoki diseinatua edo birkonbinatua
• Genetikoki Aldatua
• sintetikoa

Txerri intsulina diabetesa izan da luzeena. Bere aplikazioa aurreko mendeko 20ko hamarkadan hasi zen.

Kontuan izan behar da txerrikia edo animalia dela azken mendeko 80ko hamarkadara arte droga bakarra. Hori lortzeko, animalien pankreako ehuna erabiltzen da.

Hala ere, metodo honi nekez deritzogu optimoa edo sinplea: lehengai biologikoekin lan egitea ez da beti komenigarria, eta lehengaia bera ez da nahikoa.

Gainera, txerri intsulinaren osaera ez dator guztiz pertsona osasuntsu batek sortutako hormonaren konposizioarekin: aminoazidoen hondakin ugari daude egituran. Esan beharra dago, behien pankreak sortutako hormonek desberdintasun are handiagoa dutela, eta hori ezin da fenomeno positiboa deitu.

Halako prestakin batean, osagai anitzeko substantzia hutsez gain, proinsulina deitzen da beti, hau da, ezin da garbitu metodo modernoekin bereizteko substantziarik. Bera da askotan erreakzio alergikoen iturri bihurtzen duena, bereziki arriskutsua baita haurrentzako eta adinekoentzat.

Farmaziak berriro ere diabetikoei dirua eman nahi die. Europako droga moderno zentzudun bat dago, baina lasai mantentzen dute. Hau.

Hori dela eta, mundu osoko zientzialariek aspaldidanik interesa dute animaliek sortutako hormonaren konposizioa pertsona osasuntsu baten hormona osasuntsu betetzeko. Diabetearen farmakologian eta tratamenduan aurrerapauso handia izan zen animalia prestaketa batean treonina eginez aminoazido alanina ordezkatuz lortutako sendagai erdi sintetikoa ekoiztea.

Aldi berean, hormona ekoizteko metodo semisintetikoa animalien prestaketak erabiltzean oinarritzen da. Bestela esanda, aldaketak jasaten dituzte eta gizakiek sortutako hormonen berdinak dira. Euren abantailen artean dago giza gorputzarekiko bateragarritasuna eta erreakzio alergikoen gabezia.

Metodo honen desabantailen artean, lehengaien eskasia eta material biologikoekin lan egiteko zailtasuna daude, bai teknologia bera eta bai sortzen den droga ere.

Ildo horretan, diabetesa tratatzeko sendagairik onena ingeniaritza genetikoak lortutako intsulina birkonbinagarria da.

Bide batez, genetikoki diseinatutako intsulina deitzen zaio eta, horrela, lortzeko metodoa adierazten da, eta lortzen den produktua gizakiaren intsulina deitzen zaio, eta horrela, pertsona osasuntsu baten pankreak sortutako hormonekiko duen nortasun absolutua azpimarratzen du.

Ingeniaritza genetikoaren intsulinaren abantailen artean, nabarmentzekoa da bere garbitasun maila eta proinsulina eza ere, erreakzio alergikoak eragiten ez dituelako eta kontraindikaziorik ez duelako.

Oso ohikoa den galdera ulergarria da: zertan datza intsulina birkonbinagarria? Dirudienez, hormona hori legamien tentsioek sortzen dute, baita Escherichia coli-k ere, mantenugai berezi batean kokatuta. Gainera, lortutako substantziaren kantitatea hain handia da, animalien organoetatik ateratako drogen erabilera erabat bertan behera uztea posiblea delako.

Jakina, ez da hau E. coli sinpleari buruzkoa, baizik eta genetikoki diseinatutako intsulina gizakia disolbagarria ekoizteko gai den geneari buruzkoa, osagaiaren eta pankrearen zelulek sortutako hormonaren berariazko osagaiak eta propietateak.

Ingeniaritza genetikoaren intsulinaren abantailak gizakiaren hormonarekiko duen erabateko antzekotasuna izateaz gain, prestatzeko erraztasuna, lehengaien kopuru nahikoa eta kostu merkeak dira.

Mundu osoko zientzialariek diabetearen tratamenduan intsulina birkonbinatzaileen ekoizpena egiazko aurrerapen gisa deitzen dute. Aurkikuntza honen esanahia oso handia eta garrantzitsua da zaila dela gainestimatzea.

Aski erraza da ohartzea gaur egun hormona horren beharra ia% 95 genetikoki diseinatutako intsulinaren laguntzarekin betetzen dela.

Aldi berean, aurretik drogen alergia zuten milaka lagunek bizitza normala izateko aukera jaso zuten.

31 urtez diabetesa izan nuen. Orain osasuntsu dago. Baina, kapsula horiek jende arruntarentzat eskuraezinak dira, ez dute farmaziak saldu nahi, ez da errentagarria.

Gizakiaren ingeniaritza intsulina nola funtzionatzen duen

1 motako diabetes mellitus tratamenduan, gizakiaren bi fasetako ingeniaritza genetikoa intsulina erabiltzen da. Farmazietan, irtenbide moduan saltzen da eta "Maite" marka du. Bigarren gaixotasun mota ere droga batekin tratatu daiteke, agindutako sendagaiak diabetikoentzako egokiak ez badira.

Genetikoki diseinatutako intsulina ere erabiltzen da pertsona batek coma diabetikoa badu. Medikuek normalean diabetes mellitusarekin diagnostikatutako haurdunentzako injekzioak errezetatzen dituzte azukrea jaisteko pilulak eta dieta terapeutikoa laguntzen ez dutenean.

Orokorrean, genetikoki diseinatutako intsulinak edo OGMak erabiltzen dira erditzean, ebakuntza jasaten ari direnean, edo diabetikoa larri zaurituta badago. Droga modu azkarrean eragiteko hormonen erabilerara segurtasunez aldatzeko aukera ematen du.

1. Intsulina gizakiaren ingeniaritza genetiko bifasikoa erabili aurretik, proba bat egin behar da eta jakiteko sendagai hori egokia den gaixoarentzat. Diabetiko batek hipogluzemia agerian uzten badu, ez da gomendagarria botika erabiltzea.
2. Konponbidearen ekintza-eskema genetikoki diseinatutako intsulinak zelulekin elkarreragiten duela da, eta horrek konplexuak eratzea eragiten du. Zelulak konplexu horietan sartzen direnean, estimulatu egiten dira eta aktiboki lan egiten hasten dira. Ondorioz, entzima gehiago sortzen dira.
3. Prozesuan glukosa azkarrago xurgatzen da, gorputzean sartzen diren karbohidratoak modu aktiboan prozesatzen dira. Horrela, gibelak glukosa gehiago sortzen du eta proteinak askoz azkarrago xurgatu daitezke.

Botikaren ekintza printzipioa dosiaren, intsulina motaren, injekzio gunearen aukeraren araberakoa da. Edozein prozedura bertaratutako medikuarekin adostuta egin behar da soilik. Lehen injekzioak gainbegiratze medikoarekin egiten dira.

Droga erabiltzeko gomendioak

Gisa bezalako edo intsulina gizakiaren ingeniaritza genetiko bifasikoak izen desberdinak ditu. Halaber, hormonek ekintzaren iraupena aldatu dezakete, konponbidea prestatzeko metodoa. Produktuak intsulina motaren arabera izendatzen dira.

Genetikoki diseinatutako intsulinak Humudar, Vozulim, Actrapid bezalako sendagaien zati dira. Insuran, Gensulin. Hau ez da horrelako drogen zerrenda osoa, haien kopurua nahiko handia da.

Goiko sendagai guztiak aldatu egiten dira gorputzaren esposizioari dagokionez.GMOek hainbat ordu iraun dezakete edo egun osoak egon daitezke.

Bi fasetako konbinazioko sendagaiak drogen esposizio-aldia aldatzen duten zenbait osagai biltzen dituzten drogak daude.

• Horrelako drogak nahaste moduan saltzen dira, genetikoki lortutako hormonak barne.
• Funts horien artean daude Mikstard, Insuman, Gansulin, Gensulin.
• Drogak egunean bi aldiz erabiltzen dira, otordu baino ordu erdi lehenago. Honelako sistema zorrotz bete behar da, hormona zuzenean lotuta baitago janari-hartze aldiarekin.

Giza intsulinaren produkzioaren bidez, prestaketa bat lortzen da, batez besteko esposizio denbora duena.

1. Konponbidea 60 minuturen buruan gertatzen da, baina jarduera goreneko unea injekzioaren ondorengo sei eta zazpi orduetara behatzen da.
2. Sendagaia gorputzetik guztiz kentzen da 12 ordu igaro ondoren.
3. Hala nola, drogak Insuran, Insuman, Protafan, Rinsulin, Biosulin daude.

Gorputzak esposizio epe laburra duten Gmoak ere badaude. Horien artean, drogak intsulina Actrapid, Gansulin, Humulin, Insuran, Rinsulin, Bioinsulin. Hala nola, intsulinak fase aktiboa dute bi eta hiru orduren ondoren, eta botikaren ekintzaren lehenengo seinaleak injekzioa gertatu eta ordu erdi lehenago ikus daitezke.

Intsulina eman aurretik, Gmoak gardentasuna eta likidoan atzerriko substantziak egon ez daitezen aztertu behar dira. Medikuntzan atzerriko substantziak, hezetasuna edo prezipitazioak agertzen badira, botella bota egin behar da - sendagaia ez da erabiltzeko egokia.

Erabilitako intsulinak giro-tenperaturan egon behar du. Hormonaren dosia doitu egin behar da diabetikoek gaixotasun infekziosoak, tiroideen disfuntzioak, Addisonen gaixotasuna, hipopituitarismoa eta giltzurrunetako gaixotasun kronikoa badituzte.

Hipogluzemiaren aurkako erasoak posible dira drogaren gaindosi batekin, intsulina mota berri baterako trantsizioaren kasuan, otorduak saltatzeko edo iragazi fisikoa egiteagatik. Errua hormona baten beharra murrizten duten gaixotasunak ere izan daitezke: giltzurrunetako gaixotasun maila larria, gibeleko gaixotasuna, tiroide guruina gutxitu, kortex adrenala eta guruin pituitarioa.

1. Odol azukrearen beherakada handia posible da injekzio eremuan. Hori dela eta, intsulina mota batetik arrazoiz aldatu behar da, arretako sendagilearekin adostu ondoren soilik.
2. Diabetiko batek intsulina ekintza laburra erabiltzen badu, batzuetan, gantz-ehunaren bolumena txikitzen da injekzio gunean edo, alderantziz, handitu egiten da. Hori gerta ez dadin, injekzioa leku desberdinetan egin behar da.

Haurdun dauden emakumeek jakitun izan behar dute intsulina-eskakizunak haurdunaldiko hiruhileko desberdinetan alda daitezkeela. Horretarako, glukometro batekin odol azukrearen eguneroko proba egin behar duzu.

Intsulinak gizakiarengan duen ekintza artikulu honetako bideoan zehatz-mehatz deskribatzen da.

1. Intsulinaren 5. egitura eta funtzioak

1.1. Intsulina molekularen 5. egitura

1.2. Intsulinaren garrantzia biologikoa 7

1.3. Intsulina Biosintesia 8

2. Ingeniaritza genetikoaren intsulinaren sintesia 10

2.1. Drogak sintetizatzeko ingeniaritza genetikoko metodoak erabiltzea 10

2.2. Ingeniaritza Genetikoko Metodoak 11

2.3. Ingeniaritza genetikoaren intsulina ekoizpena 14

18. ondorioa

Gaindosi sintomak

Intsulina erabiltzerakoan, garrantzitsua da medikuaren gomendioak jarraitzea eta agindutako botikaren dosi zehatza behatzea.

Arauak ez betetzeagatik eta gaindosirik egonez gero, diabetikoak buruko minak, cramps, gosea, izerdia, bihotz-maiztasuna izaten hasten da, pertsona gehiegizkoa da, narritatuta. Gorputz osoan hotzak eta dardarak ere antzeman daitezke.

Halako sintomak odol glukosa gutxitzen ari diren seinaleen oso antzekoak dira.Sintomak agertze arinarekin, diabetikoak independentziaz konpondu dezake arazoa eta egoera hobetu. Horretarako, gozokiak edo azukrea duen beste edozein produktu gozo jan.

• Ketiko diabetikoa gertatzen bada, dextrosa irtenbide bat erabiltzen dute, drogak barnean ematen dira, pertsona kontziente izan arte. Lehen seinale susmagarrietan anbulantzia deitu behar da, pazientea larrialdi metodoen bidez bizitzeko gai izango dena.
• Gmoak erabili ondoren bigarren mailako efektuak izanik, pertsona batek larruazalean erupzioak izaten ditu urtikariari esker, gorputzeko atalak puzten dira, odol presioa nabarmen jaisten da, azkura eta arnasaren gabezia gerta daitezke. Droga baten aurkako erreakzio alergikoa da, denboraren buruan bere kabuz desagertu baitaiteke esku-hartze medikoa egin gabe. Egoerak jarraitzen badu, zure medikuari kontsultatu beharko zenioke.
• Intsulina prestatzeko hartu duten lehen egunetan, diabetikoek gorputza askotan deshidratatzen dute, pertsona batek fluido falta sumatzen du, gosea okertzen da, besoen eta hanken gainean hantura agertzen da eta etengabeko loa nabaritzen da. Normalean, horrelako sintomak azkar desagertzen dira eta ez dira gertatzen.

Iritziak eta iruzkinak

2. motako diabetea dut: intsulina ez den menpekoa. Lagun batek DiabeNot-ekin odol azukrea jaistea gomendatu zuen. Internet bidez agindu nuen. Harrera hasi zen.

Dieta ez zorrotza jarraitzen dut, goizero 2-3 kilometro oinez hasten nintzen. Azken bi asteetan goizean azukrearen beherakada leuna nabaritu dut goizeko 9,3tik 7,1era eta atzo 6 arte.

1! Prebentzio ikastaroa jarraitzen dut. Arrazoi emango dut arrakastaren inguruan.

Margarita Pavlovna, Diabenoten ere eserita nago orain. SD 2. Benetan ez daukat denborarik ibiltzeko eta ibiltzeko, baina ez dut gozokiak eta karbohidratoak gehiegi erabiltzen, uste dut XE, baina adina dela eta, azukrea altua da oraindik.

Emaitzak ez dira zureak bezain onak, baina 7,0 azukre astean ez dira ateratzen. Zein glukometro neurtzen duzu azukrea? Plasma edo odol osoa erakusten al dizu? Droga hartzearen ondorioz emaitzak alderatu nahi ditut.

Mila esker horrelako mezu informatiboagatik.

Ingeniaritza genetikoaren intsulina ekoizpena

Pertsona osasuntsu sentitzeko, gorputzean intsulina maila kontrolatu behar duzu. Hormona hau nahikoa izan behar da glukosa odolean pilatu ez dadin. Bestela, traba metabolikoak izanez gero, medikuak diabetesa diagnostikatzen du.

Diabetes mellitusaren fase aurreratuaren terapia da intsulinaren kontzentrazio falta betetzea, gorputzak ezin baitu modu naturalean ekoiztu. Horretarako, intsulina disolbagarria erabiltzen da, genetikoki ingeniaritzako gizakiaren antzekoa. Pankreasak hormona horren produkzioaz arduratzen da.

Intsulina ekoizteko, hormona naturala ekoizteko teknologia ez ezik, fabrikatzaileek ere artifizialki lortutako intsulina erabiltzen dute. "Solubilis" markatutako droga disolbagarria dela adierazten da.

Droga motak

Gisa bezalako edo intsulina gizakiaren ingeniaritza genetiko bifasikoak izen desberdinak ditu. Halaber, hormonek ekintzaren iraupena aldatu dezakete, konponbidea prestatzeko metodoa. Produktuak intsulina motaren arabera izendatzen dira.

Genetikoki diseinatutako intsulinak Humudar, Vozulim, Actrapid bezalako sendagaien zati dira. Insuran, Gensulin. Hau ez da horrelako drogen zerrenda osoa, haien kopurua nahiko handia da.

Goiko sendagai guztiak aldatu egiten dira gorputzaren esposizioari dagokionez. GMOek hainbat ordu iraun dezakete edo egun osoak egon daitezke.

Bi fasetako konbinazioko sendagaiak drogen esposizio-aldia aldatzen duten zenbait osagai biltzen dituzten drogak daude.

• Horrelako drogak nahaste moduan saltzen dira, genetikoki lortutako hormonak barne.
• Funts horien artean daude Mikstard, Insuman, Gansulin, Gensulin.
• Drogak egunean bi aldiz erabiltzen dira, otordu baino ordu erdi lehenago. Honelako sistema zorrotz bete behar da, hormona zuzenean lotuta baitago janari-hartze aldiarekin.

Giza intsulinaren produkzioaren bidez, prestaketa bat lortzen da, batez besteko esposizio denbora duena.

1. Konponbidea 60 minuturen buruan gertatzen da, baina jarduera goreneko unea injekzioaren ondorengo sei eta zazpi orduetara behatzen da.
2. Sendagaia gorputzetik guztiz kentzen da 12 ordu igaro ondoren.
3. Hala nola, drogak Insuran, Insuman, Protafan, Rinsulin, Biosulin daude.

Gorputzak esposizio epe laburra duten Gmoak ere badaude. Horien artean, drogak intsulina Actrapid, Gansulin, Humulin, Insuran, Rinsulin, Bioinsulin. Hala nola, intsulinak fase aktiboa dute bi eta hiru orduren ondoren, eta botikaren ekintzaren lehenengo seinaleak injekzioa gertatu eta ordu erdi lehenago ikus daitezke.

Horrelako drogak sei ordu igaro ondoren erabat kanporatzen dira.

Diabetesarentzako genetikoki diseinatutako gizakiaren intsulina xurgatzeko erabiltzea

Giza genetikoki diseinatutako intsulina, pankrea sortzen duen intsulinaren ordezko hormona ordezkoa da.

Genetikoki aldatutako giza hormona ez ezik, sintetikoki sortutako substantzia ere erabiltzen da. Droga sortzeko beste aukera ezagun bat txerri intsulina erabiltzea da, izan ere

bere osaera eta funtzioetan gizakiarengandik hurbilen dago.

Ingeniaritza genetikoa intsulina ekoizteko egutegia.

Adierazpenak eta kontraindikazioak

Genetikoki diseinatutako intsulina 1 motako diabetesa eta 2 motako diabetesa erabil daitezke, izaera hipogluzemikoa duten ahozko sendagaiekin erreakzio etengabea antzematen denean.

Gaixoak zenbait coma mota daudenean erabil daiteke. Haurdun dagoen emakumea diabetesa jasotzen hasi besterik ez bada, ingeniaritza intsulina erabiltzea baimentzen da, baina dietak glukosa-mailetan eragiten ez badu laguntzen du. Bere erabilera gomendagarria da hipertermia behatu daitekeen infekzioak dituzten kasuetan.

Gene-prestaketek arrakasta izaten dute erditzean, eragiketetan, lesioetan, nahaste metabolikoetan eta ekintza luzea duten intsulina pixkanaka trantsizioan gertatzen direnean.

Debekatuta dago hormona ordezkatzeko hormona ordezkatzea drogako zenbait elementuren hipersentsibilitatearekin eta hipogluzemiarekin.

Drogaren ekintza farmakologikoa

Mota horretako drogek zelulen mintz batzuen hartzaile batzuekin erreakzionatzen dute eta hauekin konplexuak eratzen dira. Zeluletara sartzen denean, drogaren konplexuak lanari eragiten dio, aktiboagoa izan dadin eta entzima osagarriak sortuz.

Glukosa maila jaitsi egiten da zelulek azkarrago prozesatzen dutelako. Horren ostean, lipogenesiaren prozesua, proteinen ekoizpena azkartu egiten da eta glukosa glukosa eratzeko abiadura murrizten da.

Sendagaiaren iraupena injekzio gunearen, droga motaren, dosiaren eta gizakiaren gorputzaren erantzun indibidualaren araberakoa izango da. Mediku batek bakarrik jar ditzake dosiak eta prescribe zenbait talde talde horretan. Droga hartzearen hasierako aldian, pazienteak arreta handiz kontrolatzen ditu medikuak, drogak errefusatzen diren jakiteko.

Genetikoki diseinatutako giza intsulina sendagaien adibideak

Giza genetikoki diseinatutako intsulina, Insranran, Insuman, Vozulim, Penfill, Biosulin, Gensulin, Actrapid, Rinsulin, Humulin, Humudar, Rosinsulin eta beste batzuetan bezalako sendagai ezagunetan dago.

Intsulina mota ezberdinak daude.Sailkapenetako bat drogaren iraupenari dagokio. Haren arabera, intsulina disolbagarriak ekintza labur eta luzea izan dezake. Droga konbinatuak (intsulina bifasikoa) daude, ekintza azkarreko eta luzea duten substantziak.

Sendagai mota horri nahasketa deritzo. Horien artean, badira gizakiaren hormona aldaketarekin sortutakoak. Bi faseetako intsulina Mikstard, Gansulin, Insuman, Humulin eta Gensulin dira. Egunean bitan erabili behar dira, otorduak baino ordu erdi lehenago.

Izan ere, intsulina bi-fasea ekintza laburra duen substantzia da, eta horren ingesta dietaren araberakoa da.

Giza hormonaren ingeniaritza analogikoa da batez besteko iraupena duten sendagaien artean. Intsulina disolbagarria hau ordubete igaro ondoren hasten da eta bere jardueraren gailurra 7 ordu igaro ondoren gertatzen da. 12 ordu igaro ondoren, bistaratzen da. Talde honen genetikoki diseinatutako droga: Insuman, Protafan, Humulin, Rinsulin, Biosulin, Gensulin, Gansulin, Insuran dira.

Taldekoen artean genetikoki diseinatutako droga bat dago ekintza motz batekin. Adibidez, horien artean daude Gansulin, Insuran, Humulin, Rinsulin, Gensulin, Bioinsulin eta Actrapid. Halako intsulina disolbagarria ordu erdi batean hasten da eta bere jarduera ordu pare batean gehienezko mailara iristen da. Horrelako drogak 6 orduz kanporatzen dira.

Genetikoki diseinatutako intsulina duten drogen sobredosi bat gertatuz gero, ahultasuna, loa, nekea, suminkortasuna, hotzak, izerdi hotzaren excretiona, dardara, zuritasuna, palpitazioak, buruko minak, kalamuak eta gosea gerta daitezke. Hori guztia hipogluzemiaren sintomak dira.

Gaixotasun hau garatzen hasi besterik ez bada eta errazagoak badira, orduan zeure burua sintoma guztiak ken ditzakezu. Horretarako, azukrea eta karbohidrato ugariko elikagaiak jan behar dira, erraz digeritu daitezkeenak. Glutagonoa eta dextrosa soluzioa gorputzean sartu daitezke.

Pertsona koma batean erori bada, dextrose irtenbide bat injektatu behar duzu egoera hobetu arte.

Zenbait pertsonak genetikoki eraldatutako sendagaien intsulina erabiliz erreakzio alergikoak sor ditzakete. Sintomak erlauntza, hantura, indarra galtzea, hipertentsio baxua, arnasa gutxitzea, erupzioak, sukarra eta azkura izan daitezke.

Zenbait kasutan, hipogluzemia eta koma gertatzen dira. Giza kontzientziarekin eta baita koman ere arazoak sor daitezke. Gaixo batek botikak galduz gero, hipergluzemia garatu dezake.

Aurretiazko dosi baxuengatik agertzen da, gorputzean fenomeno infekziosoen garapenarekin, eta, gainera, ez duzu dietaren arauekin bat egiten.

Zenbait kasutan, gaixoak lipodistrofia garatu dezake drogak ematen dituen lekuetan.

Drogaren erabileraren hasieran, zurgintasuna, ur falta, lotsa eta jateko gogoa gerta daitezke. Baina fenomeno horiek aldi baterakoak dira.

Genetikoki diseinatutako substantzia bezalako intsulina natural ordezko bat erabiltzea osagarri bikaina da diabetearen tratamenduan.

Azukre maila murrizten laguntzen du glukosa zelulak gehiago xurgatzen delako eta garraiatzeko prozesuak aldatzen direlako. Baina sendagai horiek medikuaren preskripzioaren arabera zorrotz erabili behar dira, izan ere

nahi gabeko osasun efektuak eragin ditzakete pazienteak.

Zertan egiten da intsulina?

Intsulina da 1 motako diabetesa tratatzeko sendagai nagusia. Batzuetan gaixotasuna egonkortzeko eta bigarren gaixotasun motaren ongizatea hobetzeko ere erabiltzen da. Substantzia hau, karbohidratoen metabolismoa dosi txikietan eragiteko gai den hormona da.

Normalean, pankreasak intsulina nahikoa sortzen du eta horrek odol azukrearen maila fisiologikoa mantentzen laguntzen du. Hala ere, arazo endokrino larriak dituztenean, pazienteari maiz laguntzeko aukera bakarra intsulina injekzioak dira.

Zoritxarrez, ezinezkoa da ahoz hartzea (pilulen moduan), digestio-aparatuan erabat suntsitzen baita eta balio biologikoa galtzen duelako.

Animalia jatorriko lehengaietatik lortutako prestaketak

Hormona hori txerrien eta behien pankreatik lortzea gaur egun oso gutxitan erabiltzen den teknologia zaharra da.

Jasotako sendagaien kalitate eskasa, erreakzio alergikoak sorrarazteko joera dago eta arazketa maila nahikoa ez dago.

Izan ere, hormona proteina substantzia denez, aminoazidoen multzo zehatz batez osatuta dago.

Txerriaren gorputzean sortutako intsulina desberdina da aminoazidoen konposizioan gizakiaren intsulinarengandik 1 aminoazidoarena, eta behiaren intsulina 3koa.

Mendearen hasieran eta erdialdean, antzeko sendagaiak existitzen ez zirenean, hala ere intsulinak medikuntzan aurrerapauso handia eman zuen eta diabetikoen tratamendua maila berri batera eramatea ahalbidetu zuen. Metodo honen bidez lortutako hormonek odol azukrea murrizten zuten, hala ere, askotan albo-efektuak eta alergiak eragin zituzten.

Sendagaien aminoazidoen konposizioaren eta ezpurutasunen desberdintasunek gaixoen egoerari eragin zioten, batez ere gaixo ahulagoen kategorietan (haurrak eta nagusiak).

Intsulina horren tolerantzia eskasa izateko beste arrazoi bat, bere aitzindari inaktiboa drogan (proinsulina) egotea da, ezinezkoa bailitzateke botikaren aldakuntza honetan kentzea.

Gaur egun gabezia horiek kenduta dituzten txerri intsulina aurreratuak daude. Txerri baten pankreatik lortzen dira, baina ondoren tratamendu eta arazketa osagarriak jasaten dituzte. Osagai anitzekoak dira eta exzipienteak dituzte.

Txerri intsulina aldatua ez da ia gizakiaren hormonaren desberdina, beraz, praktikan erabiltzen da

Gaixoek askoz hobeto toleratzen dituzte gaixoek eta ia ez dute erreakzio kaltegarriak eragiten; ez dute sistema immunologikoa inhibitzen eta odol azukrea modu eraginkorrean murrizten dute. Bovina intsulina ez da gaur egun medikuntzan erabiltzen, izan ere, kanpoko egitura dela eta, negatiboki eragiten du gizakiaren sistema immunologikoan eta gainerako sistemetan.

Ingeniaritza Genetikoa Intsulina

Diabetikoentzako erabiltzen den giza intsulina, eskala industrialean bi modutan lortzen da:

Intsulina gordetzeko baldintzak

• Intsulina txerriaren tratamendu entzimatikoa erabiliz,
• Escherichia coli edo legamiaren genetikoki eraldatutako arrainak erabiliz.

Aldaketa fisikokimikoarekin, entzima berezien ekintzaren azpian intsulina txerriaren molekulak gizakiaren intsulinaren antzekoak dira. Lortzen den prestaketaren aminoazidoen konposizioa ez da gizakiaren gorputzean sortzen den hormona naturalaren osaera desberdina.

Fabrikazio prozesuan sendagaiak arazketa handia jasaten du eta, beraz, ez du erreakzio alergikoak edo nahi ez diren bestelako adierazpenak eragiten.

Baina gehienetan intsulina aldatutako (genetikoki eraldatutako) mikroorganismoak erabiliz lortzen da. Metodo bioteknologikoak erabiliz, bakterioak edo legamiak aldatu egiten dira, horrela, beraiek intsulina sor dezakete.

Intsulina ekoizpenaz gain, bere arazketak paper garrantzitsua du. Botikak alergia eta hanturazko erreakziorik eragin ez dezan, fase bakoitzean mikroorganismoen eta soluzio guztien iragazkien garbitasuna kontrolatu behar da, baita erabilitako osagaiak ere.

Intsulina ekoizteko 2 metodo daude. Horietako lehena mikroorganismo bakar bateko bi espezie (espezie) desberdinetan erabiltzean oinarritzen da.

Horietako bakoitzak hormona DNA molekularen kate bakarra sintetizatzen du (horietako bi baino ez dira, eta espiralki bihurrituta daude).

Ondoren kate horiek lotzen dira eta, ondorioz, dagoeneko posible da intsulina forma aktiboak bereiztea inolako esanahi biologikorik ez dutenetatik.

Escherichia coli edo legamia erabiliz sendagaia lortzeko bigarren bidea mikrobioak lehenik eta behin intsulina inaktiboa (hau da, bere aurrekoa, proinsulina) sortzen duela oinarritzen da. Ondoren, tratamendu entzimatikoa erabiliz, inprimaki hau medikuntzan aktibatu eta erabiltzen da.

Ekoizpen-instalazio batzuetara sarbidea duten pertsonak beti jantzi antzerki jantzi batekin jantzi beharko dira eta horrek droga gizakiaren fluido biologikoekin duen harremana ezabatzen du.

Prozesu horiek guztiak automatizatuak izan ohi dira. Aireak eta ampoloekin eta edukiontziekin kontaktuan dauden gainazal guztiak antzuak dira eta ekipamenduekin lerroak hermetikoki itxita daude.

Bioteknologia metodoek zientzialariei diabetesa lortzeko irtenbide alternatiboei buruz hausnartzea ahalbidetzen dute.

Adibidez, orain arte, pankreako beta zelulen artifizialen ekoizpenari buruzko azterketa preklinikoak egiten ari dira, ingeniaritza genetikoko metodoak erabiliz lor daitezkeenak.

Agian, etorkizunean organo honen funtzionamendua hobetzeko erabiliko dute gaixo batean.

Intsulina prestakin modernoen produkzioa prozesu teknologiko konplexua da eta automatizazioa eta gizakien esku-hartze minimoak eskatzen ditu

Osagai osagarriak

Mundu modernoan espezifikorik gabeko intsulina ekoiztea ia ezinezkoa da imajinatzeko, izan ere, bere propietate kimikoak hobetu ditzakete, ekintza-denbora luzatu eta garbitasun maila handia lortu dezakete.

Ezaugarri horien arabera, osagai osagarriak klase hauetan banatu daitezke:

• luzagailuak (drogaren ekintza iraupen luzeagoa emateko erabiltzen diren substantziak),
• osagai desinfektatzaileak
• egonkortzaileak. Horregatik, droga-soluzioan azidotasun optimoa mantentzen da.

Gehigarriak luzatzea

Badira ekintza luzeko intsulinak, jarduera biologikoa 8 eta 42 ordu irauten dutenak (drogaren taldearen arabera). Eragin hori substantzia bereziak gehitzen direlako lortzen da - injekzio-irtenbidera luzatzaileak. Gehienetan konposatu hauetako bat erabiltzen da horretarako:

Drogaren ekintza luzatzen duten proteinek arazketa zehatza jasaten dute eta alergeno baxuak dira (adibidez, protamina). Zinka gatzek ere ez dute kalteik egiten intsulinaren jarduera edo gizakiaren ongizatean.

Intsulinaren osaeran dauden desinfektatzaileak beharrezkoak dira flora mikrobioak bertan gordetzeko eta erabiltzeko garaian ugaritu ez daitezen. Substantzia horiek kontserbatzaileak dira eta sendagaiaren jarduera biologikoa mantentzea bermatzen dute.

Gainera, gaixoak hormona bote bakarretik administratzen badu bakarrik, orduan sendagaiak zenbait egun iraun ditzake.

Kalitate handiko bakterioen osagaiak direla eta, ez du mikrobioen soluzio batean erreproduzitzeko aukera teorikoa dela eta erabili gabeko botikarik bota beharrik.

Intsulina ekoizteko produktu hauek desinfektatzaile gisa erabil daitezke:

Soluzioak zinka ioiak baditu, kontserbadore osagarri gisa jokatzen dute antimikrobianoen propietateengatik

Intsulina mota bakoitza ekoizteko, zenbait elementu desinfektatzaile egokiak dira. Hormonarekin duten elkarreragina entsegu preklinikoen fasean ikertu behar da, kontserbadoreak ez baitu intsulinaren jarduera biologikoa eten beharrik, edo, bestela, ez du eraginik izango bere propietateetan.

Kontserbatzaileak erabiltzea kasu gehienetan hormona larruaren azpian administratzea alkoholarekin edo beste antiseptikoekin tratamendurik egin gabe (fabrikatzaileak normalean aipatzen du argibideetan).

Horrek sendagaiaren administrazioa sinplifikatzen du eta injekzioa bera baino lehenagoko manipulazio kopurua murrizten du.

Gomendio honek, ordea, soluzioa orratz mehe batekin intsulina xiringa bat erabiliz ematen bada bakarrik funtzionatzen du.

Egonkortzaileak

Estabilizatzaileak beharrezkoak dira disoluzioaren pH maila jakin batean mantentzeko. Droga kontserbatzea, haren jarduera eta propietate kimikoen egonkortasuna azidotasun mailaren araberakoak dira. Diabetea duten pazienteentzako injekzio-hormona fabrikatzeko, fosfatoak xede horretarako erabiltzen dira normalean.

Zink duen intsulina lortzeko, ez dira beti behar konponbide egonkortzaileak, ioi metalikoek oreka mantentzen laguntzen baitute.

Hala ere erabiltzen badira, fosfatoen ordez beste konposatu kimiko batzuk erabiltzen dira, substantzia horien konbinazioak prezipitazio eta desegokitasuna dakarrelako.

Egonkortzaile guztiei erakutsitako jabetza garrantzitsua segurtasuna eta intsulina erreakzioekin sartzeko ezintasuna da.

Endokrinologo eskudun batek diabetesa sendagarriak diren sendagaien hautaketaz arduratu behar du paziente bakoitzarentzat.

Intsulinaren zeregina odolean azukre maila normala mantentzeaz gain, beste organo eta sistemei kalte egitea ere ez da. Droga kimikoki neutroa, alergeniko txikia eta lehentasunez merkeagoa izan behar du.

Nahiko erosoa da hautatutako intsulina beste bertsioekin nahastu daitekeen ekintzaren iraupenaren arabera.

Intsulina lortzea, ingeniaritza genetikoa egiteko metodoak, Bioteknologia - Ikastaroak

1. Intsulinaren 5. egitura eta funtzioak

1.1. Intsulina molekularen 5. egitura

1.2. Intsulinaren garrantzia biologikoa 7

1.3. Intsulina Biosintesia 8

2. Ingeniaritza genetikoaren intsulinaren sintesia 10

2.1. Drogak sintetizatzeko ingeniaritza genetikoko metodoak erabiltzea 10

2.2. Ingeniaritza Genetikoko Metodoak 11

2.3. Ingeniaritza genetikoaren intsulina ekoizpena 14