Glukosa oxidasa glukosa zehazteko metodoa

Metodoaren printzipioa. Metodoa glukosa-oxidasa entzimaren ekintzaren berezitasunean oinarrituta dago. Entzima honek glukosa oxigeno molekularraren aurrean oxidatzen du glukonolaktona eratzeko, eta horrek berehala azido glukonikoz hidrolizatzen du. Glukosa oxidasak glukosa oxidatzen du hidrogeno peroxidoa osatzeko₂Oh₂), 4-aminoantipirinarekin eta fenolarekin erreakzionatzen duena peroxidasaren eraginpean. Horren ondorioz, kolore arrosa koloreko konposatu bat eratzen da eta 510 nm-ko dentsitate optikoa laginean glukosa-kontzentrazioarekiko proportzionala da.

glukosa + O₂ + H₂Oh → azido glukonikoa + H₂Oh₂

2 N₂Oh₂ + 4-aminoantipirina + fenola → quinonimina + 4H₂Oh

ekipamendua: CPK, zentrifuga, termostatoa, errailak, probak, pipetak, material biologikoa, lan-soluzioan dauden erreaktiboak.

lagin esperimentala, ml

lagin estandarra, ml

inaktibo proba (N₂O), ml

Glukosa kalibratzeko soluzioa (erreferentzia)

Hodiak 37ºC-tan termostatoan 15 minutuz inkubatzen dira eta ondoren koloreztatu egiten dira CPC baten gainean iragazki berdea cuvettes-en geruza batekin 5 mm-ko lodiera duten lagin huts baten kontra (N₂O). Arrosa kolorea inkubatu eta ordubetera egonkorra da.

Kalkulu glukosaren edukia formulak sortzen du:

C =x C estandarra non

C lagin esperimentaleko glukosa edukia, mol / l, da

UTB - laginaren dentsitate optikoa;

Jan - kalibrazio laginaren dentsitate optikoa,

C estandarra - kalibrazio-soluzioan dagoen edukia, mol / l.

Balio normalak:  jaioberriak - 2,8-4,4 mmol / l

 haurrak - 3,9 -5,8 mmol / l

 helduak - 3,9 - 6,2 mmol / l

Hipogluzemia (GHC)Odol glukosaren hazkundea arrazoi askorengatik da, eta, horren arabera, hipergluzemia bi talde bereizten dira.

1. Insulagarria: gorputzean intsulina gutxiegirekin edo bere ekintzaren eraginkortasunagatik.

2. Extrainsular (extrainsular) - ez dago intsulinaren eraginpean.

HHCen eraketan honako prozesu hauek esanguratsuenak dira: glukogenoaren haustura handitzea, neoglucogenesis handitzea, glukogenoaren sintesia inhibitzea, ehunen glukosaren erabilera gutxitzea, intsulina hormonalaren antagonisten eraginpean: somatotropina, glukortikoideak, tiroxina, tirotropina.

Hipergluzemia elikagarria odolean glukosa gehiegi kontsumitzen dela nabarmentzen da (adibidez, azukre karga duen hipergluzemia). Hipergluzemia "hepatikoa" gibeleko lesio difusiboetan gertatzen da.

Hipergluzemia iraunkorra eta larria diabetesa lagun ohi du. Ohikoa da intsulina menpeko diabetes mellitus eta intsulina ez den mendeko diabetesa mellitus edo, hurrenez hurren, I motako diabetes mellitus eta II motako diabetes mellitus isolatzea. I motako diabetearen eraketa batez ere intsulinaren sintesia eta metabolismoarekin lotzen da.

Hipergluzemia bigarren taldea hormona ekoizten duten guruin endokrinoen hiperfuntzioarekin lotzen da batez ere, intsulinaren antagonistak. Itsenko-Cushing sindromea eta gaixotasunak, akromegalia, tiotoxikosi, feokromozitoma, glukoogomoma bezalako gaixotasunetan behatzen da. Odoleko glukosa-maila gibeleko gaixotasun jakin batzuekin handitzen da (bereziki, gibeleko zirrosia duten gaixoen% 10-30ean), hemokromatosia (gibeleko zirrosia pigmentatua, brontze-diabetea).

Hipogluzemia (GPG) - odol glukosa gutxitzea - ​​gehienetan odolean intsulina maila absolutua edo erlatiboa areagotzearekin lotzen da. Hipoglicemia estrapankatikoa gibelean glicogenolisi eta gliconeogenesiaren prozesuen larritasunaren arteko desorekaren ondorioz nabaritzen da hepatitis akutua eta kronikoa, zirrosia, gibeleko distrofia akutua eta larria, alkohol intoxikazioa, arsenikoarekin intoxikazioa, gibela primarioa, gibeleko lehen mailako gaixotasuna. . Odoleko glukosa-kontzentrazioaren jaitsiera askotan esofagoko minbizia duten eta pankreako lokalizazioaren (fibroma, fibrosarcoma, neuroma) minbizia pairatzen duten pazienteetan eta baita haurdun dauden emakumezkoen gorabehera, anorexia, hepatiko diabetesa, uremia, edoskitze oparoa eta glukosuria ere.

Hipoglicemia jatorri zentrala izan daiteke trauma mentalak, entzefalitisa, hemoragija subaraknoidea, garuneko tumorea direla eta.

Karbohidratoen digestioaren oinordekotasunak.

2. Zer hipergluzosemia mota ezagutzen duzu?

3. Zein dira hipergluzosemia patologikoaren arrazoiak?

4. Zein da intsulinaren menpeko diabetesa?

5. Zein dira gaixotasun hereditarioen kausa biokimikoak: a) glukogenosia? b) aglogenogenia? c) fruktosemia? d) galactosemia?

6. Zer dira aldaketa biokimikoak karbohidratoen metabolismoan baraualdian?

7. Glukosa-tolerantzia zehazteko metodoaren printzipioa.

Noiz aginduko da glukosa-oxidasa metodoa?

Proba hau azukre-tolerantzia urritasuna eta prediabetearen garapena antzemateko erabiltzen da, baita gaixotasunaren altueran ere. Hala ere, azterketak oso gutxitan erabiltzen dira, eta horren emaitza kostu handia eta emaitza itxaropena luzea da. Gehienetan metodo hau erabiliz glukosa eta gernuan glukosa zehazten dira, esate baterako, gaixotasunen diagnostiko diferentzialean:

Azukrea berehala murrizten da! Denboraren poderioz, diabetek gaixotasun ugari sor ditzakete, hala nola ikusmen arazoak, larruazaleko eta ilearen baldintzak, ultzerak, gangrena eta baita minbizi tumoreak ere. Jendeak esperientzia mingotsa irakatsi zuen azukre maila normalizatzeko. irakurri gehiago.

• laktosarekiko intolerantzia sindromea,
• fruktosarekiko intolerantzia
• fruktosa jariatzea gorputzeko fluidoekin,
• gernuan pentosaren kontzentrazioa handitu zen.

Glukosa-oxidasa testaren abantaila ukaezina da.

Zein da metodo honen oinarria?

Odolean glukosa-kontzentrazioa zehazteko hainbat metodo daude, baina glukosa-oxidasa da zehatzena. Azukrea atmosferako oxigenoarekin elkarreraginean zehar erreaktiboa oxidatu egiten da. Hidrogeno peroxidoa disoluzioan askatzen da. Substantzia honek ortotoluidinarekin elkarreragiten du koloretako konposatua osatzeko. Erreakzio honen portaera lortzeko, entzima bereziak egotea beharrezkoa da. Oxidazio erreakzioan glukosa oxidasa egon behar da eta likidoa zikatzean peroxidasa egon behar da. Disoluzioaren kolorearen intentsitatea glukosaren edukiaren araberakoa izango da eta intentsitate handieneko edukia izango da.

Glukosa-oxidasa glukosa zehazteko funtsa

Emaitzaren ebaluazioa fotometriaren metodo kuantitatiboa erabiliz gertatzen da denbora tarte beraren ondoren. Nahitaezkoa da azukre-arau jakin bat duen kalibrazio-soluzioa erabiltzea eta, hortik abiatuta, gorputzeko fluidoetan glukosa-kontzentrazioa, maiz, odolean kontzentratu daiteke.

Nola egiten da azterketa?

Gaixoa urdail huts baten gainean hartzen da. Proba egiteko, odol venosa erabiltzen da 5 ml-tan. Diagnostikoaren bezperan, pazienteari dieta zorrotza erakusten zaio. Horrek emaitzaren fidagarritasuna epaitzea eta analisi akatsak baztertzea ahalbidetuko du. Odola hartu baino 2 egun lehenago, pazienteak alkohola edateko eta erretzeko ohitura txarrak alde batera utzi beharko lituzke. Gehiegi gozoak diren elikagaien kontsumoa mugatu behar da, eta ahal den neurrian egoera estresgarriak saihestu.

Azukrearen plasma lortzeko, odola zentrifugatzen da.

Gehienetan glukosa-kontzentrazioa zehazteko metodo hau zentrifugazio bidez egiten da, eta hori osatzen dute elementuak. Azukre kantitatea dagoeneko zehazten da plasmatikan. Horretarako beharrezkoak diren erreaktibo guztiak gehitzen direnean, 20 minutu igaro ondoren, kolorea probatuko da tenperaturan. Glukosa kalkulatzea kalibrazio egutegiaren arabera edo errazioen araua erabilita.

Ikerketa erreaktiboak

Azukrea zehazteko, egokiena da odolean glukosa zehazteko metodo zehatzak erabiltzea. Erabilera errazak eta emaitza azkarrak direla eta. Gainera, gaixoak ez du laborategira edo ospitalera joan beharrik. Glukosa-oxidasa proba ez bezala, diagnostiko hori ez da fidagarria. Glukosa ez delako beste azukreak bereizten eta haien kontzentrazioa elkarrekin zehazten duelako.

Glukosa-oxidasaren erreakzioaren oinarria sodio kloruroa% 9ko disoluzioa da eta zink sulfatoa% 50. Odolaren zentrifugazio fasean gehitzen dira. Horrez gain, azido azetikoarekin eta sodio azetatoarekin bufferraren soluzioa erabiltzen da. Titulazio metodoak 4,8an zehazten du bere pHa. Horren ondoren, glukosa-oxidasa gehitzen da; horren ondorioz, hidrogeno peroxidoa eta peroxidasa askatzen dira. Horrek irtenbidea nahi duen kontzentraziora zikintzen parte hartzen du.

Analisian dauden arauak

Azukrearen neurketa unitate berezietan egiten da: milimetro disoluzio litro bakoitzeko.

Glukosa oxidasa odol azterketa nahitaezkoa da urdaila huts batean eta erabili plasma edo serum horretarako. Emakumeentzako eta gizonezkoentzako helduen kantitatearen araua 3,3-5,5 da. 15 urte baino gutxiago dituzten haurren kasuan, kopuru hori apur bat txikiagoa da eta 3,2-5,3 artekoa da. Jaioberrietan, odol glukosa 1,7-4,2 da. Adierazleen gehikuntza nabaritzen da diabetesa hobetzeko gaixoarekin edo glukosa-tolerantzia urritasunarekin. Baldintza hau prediabetesa da, eta garaiz tratatu gabe uzten bada, laster ekarriko du patologia larri hau.

Oraindik ezinezkoa dirudi diabetesa sendatzea?

Orain lerro hauek irakurtzen ari direla ikusita, odol azukrearen aurkako borrokan ez dago garaipena zure aldetik.

Eta dagoeneko pentsatu al duzu ospitaleko tratamendua? Ulertzekoa da, diabetesa oso gaixotasun arriskutsua delako eta, tratatu ezean, heriotza sor daiteke. Etengabeko egarria, gernu bizkorra, ikuspegi lausoa. Sintoma horiek guztiak ezagunak zaizkizu.

Baina posible al da kausa efektua baino gehiago tratatzea? Egungo diabetesa tratamenduei buruzko artikulua irakurtzea gomendatzen dugu. Irakurri artikulua >>